为啥iPS培养液体黄的这么快？

dilal

最近养小鼠的iPS细胞，饲养层培养，培养液用的是血清替代物配制（Knockout SR）的培养基（都是iPS细胞专用的），但是传代后不到一天液体就变黄了，换完液后半天再去看，液体又变黄了。镜下看iPS细胞长的也并不是很明显，怀疑跟孵箱有关，换了孵箱养结果一样。
  [& _9 X9 V* ~' c2 N一直搞不懂是怎么回事？细胞长得也不是很快，为啥液体老是变黄？请高人指点。

fananran2003

你培养液是不是用的knock-out DMEM F12,
) z1 a/ \% R0 T/ _0 }  V8 \

bunny19870512

测下PH？

微微一笑

一、可能是污染。$ J1 L4 Q  X0 |0 c
二、培养箱用了多久，最近有没有调校。我们实验室之前一个培养箱就是这种情况，设置5%CO2，显示也是5%CO2，但是工程师后面来测时发现实际CO2是2.8%。; f; P  o0 H$ b
三、DMEM F12如果没有调过PH，而直接配出来的培养液是偏酸性的。

hygene

1、测/调PH值；
" g6 C( c+ x+ L8 w  N7 P3 _( M2、考虑支原体污染，如果是那就趁早重来吧。

dilal

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# H) e* B- [. \9 O; s
是Knockout DMEM

dilal

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3 L( t1 R9 L7 w. ~3 d1 T9 v测过PH值，7.0

dilal

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8 p4 _1 E& y0 @. A
8 {5 i3 K+ [- K9 q. C1 r$ h不是污染的问题，仅仅是液体变黄，也不浑浊，而且镜下细胞状态不错，没有发现有污染的迹象。

cicadacjk

knock out serum replacement配的培养基在co2中平衡后就是黄色的，你估计加了15%，放一会应该就黄了。

dilal

回复 cicadacjk 的帖子0 X: O" |$ g. o

" V% ^7 }+ U" Q: Y/ j! @1 r是的，我们配制的浓度是15%，按照广州生物医药与健康研究所提供的配方配制的，细胞也是在他们那里买的。但是有一点特别怪，我们用这种液体养ESC细胞时（没有饲养层），液体也不变黄，但是养iPS细胞时就变黄。不知道你们有没有出现这种情况，原因在哪里？