MEF是先铺后灭活好还是先灭活后铺好？

dilal

MEF作为饲养层是先铺板待长到一定密度再用丝裂霉素灭活好？还是先用丝裂霉素灭活后一定密度铺板好？
* G( ]7 [8 z& q  [/ R个人认为，两者都有利弊。前者对于细胞状态的可控性比较好，可以选择细胞状态好的细胞进行灭活，但是不易控制MEF的铺板密度；后者灭活后消化铺板，细胞状态可能会出现波动（消化过程中的各种因素），但对于MEF的铺板密度易于控制。; G/ L' J) I5 M8 `( \
不知道各位采用的是那种方法，欢迎大家讨论各自的利弊！

christophe

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我是用的后一种方法，每次处理一大批，计数冻存，然后用的时候提前一天复苏就可以，感觉对细胞状态影响也不是太大。前一种方法每次用都要提前处理，比较麻烦。

yangpan521

楼上朋友想问问你，饲养层细胞可移冻存吗，我的做法是先用先处理，不太明白这两种有何区别，

christophe

回复 yangpan521 的帖子. ?. W  o( C/ y/ u5 @8 c& ]$ w

8 ^8 b7 Q  k* M可以冻存的，用丝裂霉素C处理完之后正常消化冻存，细胞只是没有增殖能力了，但还是活的，所以解冻之后再用是没问题的。

lemma710

我也是用后一种方法的，灭活以后，计数冻起来，要用的时候再复苏。  f$ F% g: @  a6 a1 {3 u" {( Q
但是你要提前试一下你的培养皿或者培养瓶用多少数量处理过的MEF密度比较合适，以后就可以一直用这个密度了。

dilal

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1 z5 ^3 O. S  C7 Q3 o
我师兄也说是要现用现处理，说是冻存以后细胞状态会不好，但是查看了很多干细胞培养手册都是处理后再铺板，多余细胞冻存。
  T3 }2 A0 ~; T) L7 I+ N  u个人觉得现用现处理的话工作量太大了，做一个原代多次传代以后是可以得到大量的细胞的，远远超过了ESC培养所需要的细胞量。多余的细胞不冻存的话实在是浪费，孕鼠死的都有点怨。另外，MEF用于feeder以第三代细胞最好，最好不要超过6代，如果现用现处理的话，缩短了原代使用的期限。

yangpan521

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# ]3 p- p. d2 k( z& A* X# q! F0 ]3 J; e4 g& b- H' n
有没有比较过解冻的饲养层与现铺的区别大吗，解冻的有没有漂很多死细胞

懵懂干细胞

我一般是在P2-P3代把细胞用丝裂霉素处理之后再冻存，然后再复苏出来做饲养层，* @+ H7 Q' M" P0 k. B& a+ W2 @4 Y" y/ L
考虑周到一点的话，可以在P1-P2代就不用丝裂霉素处理冻存一批，等要用的时候可以
9 e7 k, ~" ^& D* B& }. Q复苏出来，传一代再现处理现用，这样就可以有足够的MEF细胞用，也不会纠结冻存前处理还是冻存后处理。8 y! N! n+ \! E: R2 N* |

dilal

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, S" `* f( |9 ~5 R1 f1 @. K谢谢，不错的方法，借鉴一下

christophe

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" |) F; |7 t! f' N. g& [6 y8 a; H; U! j区别不大，基本上死的很少。