免疫荧光染色用PBS和TBS有无区别

深海鱼

做细胞的免疫荧光染色，有用PBS有用TBS的，二者都是缓冲液，不知有啥区别，哪个更好一点？另外PBS必须是细胞培养的PBS吗？自己配制可不可以，会影响结果吗？请各位大侠不吝赐教，感激不尽

menghy

我个人认为PBS还是要好一些，因为TBS里面含有HCL对实验肯能会有一些影响。做免疫荧光的话一般自己实验室配制的PBS就可以，细胞培养级别就是纯度更高一些，你用分析纯的试剂配制PBS完全可以满足实验的需要了！

深海鱼

回复 menghy 的帖子
: \- R5 R  B  T; C
! ^( l2 H' n0 t& v6 I. }! Q谢谢大侠指教; b; c9 H7 W+ Q  k  u- n
不过网上PBS的配制方法有很多，难以取舍，大侠能否告知您的配方？

oucflora

细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我也是用的超纯水，给你一个配方：3 U$ P* i, q0 G  D0 }# e( B
KCl                          0.2g/L5 [3 g9 L! w: \- X
KH2PO4                  0.2g/L
2 F+ l$ s8 H3 rNaCl                        8.0g/L3 l( j2 T. ]) z, ]
Na2HPO4.7H2O      2.16g/L( u) w' P# l- b7 Y9 s$ a! K. A
用超纯水定容到1L 即可；最好是现用现配，4摄氏度保存。
. E* h/ F% z7 C5 U+ O. I/ ]7 T+ W5 j7 ?5 r( f2 X
  

oucflora

以上配方中所列的试剂用国产的分析纯即可。如果没有超纯水，也可以用三蒸水代替。

linlicau

没什么区别。( W2 a9 d) [, N' }1 W4 w5 B( H" [% P
) I& U9 S  h# {7 k- }+ n% `. C3 r
PBST和TBST的区别一般在做磷酸化实验的过程中要用TBST，因为PBST有磷酸，会影响结果。
# ~: [! j( ~6 o- C
- F& U* [9 D& e$ eImmunostaining用什么都无所谓。1 P$ Z. d/ E+ I/ s8 B
% T. t4 g, Q* i- S
PBS配方：
+ s  S0 Z7 U1 ohttp://www.ihcworld.com/_protocols/washing_buffers/pbs.htm

oucflora

  z: Z( T3 m' O! F; O" ?

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42
- G+ ]7 T, ^- D( q% J% @: Q细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

5 x6 n: P3 Q/ P2 v- p4 b- o
3 [# e0 P! G9 f4 s8 a$ Y8 R
其实关于PBS的配方问题我以前查阅过很多资料，不过在刘爱平主编的《细胞生物学荧光技术原理和技术》（中科大出版社出版）这本书中介绍说PB（phosphate buffer）为磷酸缓冲溶液，只有Na2HPO4和NaH2PO4两种成分。而PBS（phosphate buffered saline）称为磷酸缓冲生理盐水，是在PB的基础上添加了NaCl等成分。3 V  w4 M+ D: y: X5 f. R
在PB和PBS的选择上，个人认为对于活细胞的漂洗工作最好用PBS，细胞被固定后就没有太多的要求了。
- c: B0 i6 ]; m. z' x* A5 m上面我列举的PBS的配方来源于薛庆善的《体外培养原理与技术》这本书。咱们论坛有电子版，下载地址：http://www.stemcell8.cn/thread-36261-1-1.html

menghy

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42
" R6 j: X. T* s9 K8 A9 E) E细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

3 d& p1 l* h6 \. ?我们PBS的配方和这位坛友的是一样的！后面有事情就没有来得及回，不好意思！

ljs

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% ?% ]. f% A6 C! f
5 I, X& S8 n# A8 Z' j+ sPBST中的T是什么意思？

linlicau

ljs 发表于 2011-7-28 16:58 / D: K8 ~+ z$ Z* \( E
回复 linlicau 的帖子9 \) h9 f9 P" `( e6 {4 [% u
) j. M: O$ e# ^6 U
PBST中的T是什么意思？

: f/ u* o2 }0 l7 _
你在洗的时候不是用PBS或者TBS洗，而是使用加了Tween-20的PBS或者TBS洗。一般一升的PBS/TBS加1ml Tween-20。充分摇匀后使用。