免疫荧光染色用PBS和TBS有无区别

深海鱼

做细胞的免疫荧光染色，有用PBS有用TBS的，二者都是缓冲液，不知有啥区别，哪个更好一点？另外PBS必须是细胞培养的PBS吗？自己配制可不可以，会影响结果吗？请各位大侠不吝赐教，感激不尽

menghy

我个人认为PBS还是要好一些，因为TBS里面含有HCL对实验肯能会有一些影响。做免疫荧光的话一般自己实验室配制的PBS就可以，细胞培养级别就是纯度更高一些，你用分析纯的试剂配制PBS完全可以满足实验的需要了！

深海鱼

回复 menghy 的帖子
" t/ V& W% w8 C$ t" V$ m
  d; O. ?, ]! B8 m8 ^# B谢谢大侠指教
7 ?1 A& O5 q3 f; L) ^5 }6 x* e不过网上PBS的配制方法有很多，难以取舍，大侠能否告知您的配方？

oucflora

细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我也是用的超纯水，给你一个配方：
; t$ l) b% E/ EKCl                          0.2g/L; n  p) B# y9 N
KH2PO4                  0.2g/L
) n; M( f: ], E4 QNaCl                        8.0g/L
7 x0 y1 Y! @# M. _7 L  B6 sNa2HPO4.7H2O      2.16g/L6 N- n9 {) q# b4 f, w. q
用超纯水定容到1L 即可；最好是现用现配，4摄氏度保存。
7 X" s+ V5 ~+ Y$ D' `
5 f1 W2 k8 ]" b& [; l0 _  

oucflora

以上配方中所列的试剂用国产的分析纯即可。如果没有超纯水，也可以用三蒸水代替。

linlicau

没什么区别。
0 c3 Q8 F, }# g7 c
3 j; v8 t& g' _- c) _0 NPBST和TBST的区别一般在做磷酸化实验的过程中要用TBST，因为PBST有磷酸，会影响结果。
' r2 I- c; ?3 }3 y7 l9 {& x$ x) \4 Y  e3 @& K% w) |. n, H# H
Immunostaining用什么都无所谓。
4 o" U; D1 y( L/ ?' c, T+ o0 ?% Z: N+ H
PBS配方：% h/ Y2 s$ E9 V- W0 U4 Y% n
http://www.ihcworld.com/_protocols/washing_buffers/pbs.htm

oucflora

" \& c/ c3 T# @/ E; I) J, y

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42
1 B5 M6 E" m  t( @6 R/ U细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

3 F- R, }: Q! e* p9 F) w5 R- k2 o6 ^0 c8 B& r7 f1 B
其实关于PBS的配方问题我以前查阅过很多资料，不过在刘爱平主编的《细胞生物学荧光技术原理和技术》（中科大出版社出版）这本书中介绍说PB（phosphate buffer）为磷酸缓冲溶液，只有Na2HPO4和NaH2PO4两种成分。而PBS（phosphate buffered saline）称为磷酸缓冲生理盐水，是在PB的基础上添加了NaCl等成分。
% L% ]5 F: o3 ~$ E; g在PB和PBS的选择上，个人认为对于活细胞的漂洗工作最好用PBS，细胞被固定后就没有太多的要求了。
; }1 l6 V: L& G( D2 {5 J上面我列举的PBS的配方来源于薛庆善的《体外培养原理与技术》这本书。咱们论坛有电子版，下载地址：http://www.stemcell8.cn/thread-36261-1-1.html

menghy

oucflora 发表于 2011-7-28 11:42
, b1 i4 s0 w# l: I+ N3 E! |细胞的免疫荧光染色，我都用PBS，因为细胞培养用品都是用超纯水配制，所以做细胞的免疫荧光染色时用的PBS我 ...

, C5 Y7 @# N. h* K4 ^. {0 N我们PBS的配方和这位坛友的是一样的！后面有事情就没有来得及回，不好意思！

ljs

回复 linlicau 的帖子
# U1 |# v3 Q8 c8 |4 B  i
+ t6 D$ t. a8 f( t9 C" mPBST中的T是什么意思？

linlicau

ljs 发表于 2011-7-28 16:58
5 J2 l0 x* l- t% u- Q8 m( K回复 linlicau 的帖子& D  L, z- d% Y9 x- a! _2 M2 b  b

/ `" ~" X% y/ SPBST中的T是什么意思？

7 ^% H- G2 f! m. Y1 G3 z
你在洗的时候不是用PBS或者TBS洗，而是使用加了Tween-20的PBS或者TBS洗。一般一升的PBS/TBS加1ml Tween-20。充分摇匀后使用。