求教：成纤维细胞原代状态不好的原因

牙牙丫丫123

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$ j$ _' G  h$ c+ F- a/ z% e, _1 H- Q我养的是猪的胎儿成纤维洗吧，原代培养方法是0.25%胰酶消化，终止离心后接种，10%FBS的培养液，原来用这种方法培养细胞生长很好，可是这次培养时，第二天细胞长出来就特别老，而且细胞全是小黑点，请问这是什么原因造成的……是血清或者培养液PH值的问题吗？6 I* m6 \  O% e0 M3 Q2 W5 l

wangshumin12311

这细胞救不回来了，，，重新来过，，，看有没有支原体或者细胞受啥罪了，，，血清正常的话不会出现这情况，，，，话说你是哪个单位，，，做猪的？

牙牙丫丫123

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& z1 y& d5 T- F! u' s您觉得这更像是支原体污染？我是东北农业大学的，我们实验的主攻方向是猪

军医

是不是抗生素加多了？

星移龙一

我们实验猪的用的都是15%~20%的FBS，原代都很好啊，传代生长也很好，不知是不是这个问题。

牙牙丫丫123

回复 军医 的帖子4 n9 J7 e# \9 w7 ~% _
3 \* ]* c5 y  f+ d9 f
我加的正常抗生素用量

牙牙丫丫123

回复 星移龙一 的帖子( i! h5 \4 F: f( g
) \; C- H! `8 c  V4 ?& l
能请问一下您是怎么做原代细胞培养吗？
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牙牙丫丫123

回复 星移龙一 的帖子8 |- w8 R4 O0 }1 E

  p/ X6 F! g( O: Z8 P还有，我这次使用的是10%的培养液，有没有可能是血清质量本身不好，然后再加上血清浓度低，导致细胞营养不良呀……然后细胞就长成这样了+ b* E0 G2 i' p

军医

回复 牙牙丫丫123 的帖子3 z2 Y+ e7 f1 T$ R' e
3 M2 H6 _6 a0 T" ?
我们用10%的血清养原代也挺好的，是不是时间长了，迁出的细胞长的太密了，生长抑制了

星移龙一

回复 牙牙丫丫123 的帖子8 u8 O; _$ t- R4 _& @: G, B$ W) Y
7 H- p3 K. B, u' y' W' U1 \, Z/ h
胎儿的取部分组织，剪碎后涂板培养，
# c4 m+ P1 K& v成体的一般是耳源的，将毛刮去后，剪碎涂板。