关于PEG8000的配制问题

huangcong1988

不知道40%的PEG8000怎么配制，有的说是直接用去离子水配，也有说用去离子水配后加氯化镁，到底是怎么配制呢？而且PEG8000是用来浓缩核酸的么？

john7812x

聚乙二醇(PEG)在不同的盐溶液中可以结合形成孔径不同的网状结构,重组质粒是超螺旋的双链闭合环状DNA,它们与RNA 、线状DNA等其他杂质分子在PEG中的沉降系数不同。通过高速离心，使沉降系数较高的重组质粒DNA沉淀下来，而其他杂质分子和不同构象的质粒DNA分子被网状结构阻隔，从而纯化质粒。$ c' Z& E/ K" g

huangcong1988

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+ C  I- L# `5 r: m5 [& ~7 I) m, O% V/ W# T4 ~
哦，纯化RNA也行是吧？那40%的PEG8000该怎么配呢？

zhusealin

浓缩核酸的不太清楚。我们是用的50%PEG 1500做细胞融合用的，配的时候就用PBS溶解，高压灭菌

huangcong1988

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2 i0 m( W' J; H& m9 P+ y  q( c
- D1 Q" {3 Y( W是，PEG也用于细胞融合

john7812x

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9 _2 P4 j# _' H' x( G1 i
( @9 k2 o$ L. G  _4 n0 HPEG8000可以纯化RNA，如网页中所述：http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/16186.html
/ y. w6 p" k8 A- `- h+ v6 H1 j但是，我没有用过PEG8000提取RNA，我用试剂盒提取小量RNA，或用Trizol提取大量RNA。
/ z9 ]) R0 K7 u
# s5 P; G% L. o9 R3 q. t5 C0 m! k6 ~40%（w/v）PEG8000 用去离子水配，如文件中黄色部分所示：- A) s. {) x- O
; d) L$ \. t& |. l- {

5 j2 j: i1 Y! |' z8 R, z8 _- ^假如你打算用PEG8000 提取RNA，建议用DEFC处理过的去离子水来配制。

huangcong1988

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+ W1 K  {0 Q4 a2 ?' x3 E不是提RNA，是浓缩，就是已经收集的慢病毒上清，想用PEG8000纯化一下，谢谢

huangcong1988

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  D, k5 w& B5 o, e/ n% ^2 P0 o5 ~3 p& f1 J( c2 |
有道理，慢病毒上清要纯化的话呢？慢病毒是RNA+外壳（蛋白），那去离子水是应该用DEPC水处理一下

john7812x

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" W4 H3 k  `, \6 A' f/ o
, Q! g% x& R& w  W3 J你是不是打算浓缩Lentivirus，来提高它的滴度, 为下步感染实验做准备?  f- A! B2 r% O
还是要浓缩Lentivirus 的RNA？9 q; F/ m( V# v0 @( I. x0 g, i: N
9 b0 Z" W1 Z7 f# i+ F
若是为了提高病毒滴度可以超速离心的方法：
. X" @0 s5 H) k: h) u, d; C, @0 t
" }  L% N3 h, C7 J. c若是为了浓缩RNA，可以冷冻干燥，或沉淀RNA后再溶解，等等。
( d+ l$ m4 ]! w! v5 V( j5 ]# l9 r" W( ~9 s! {5 G8 ]" H
补充内容 (2011-11-1 19:54):
) ~* n) w  K% p+ t0 A在这个超速离心的protocol 里用的是sucrose, 没有用PEG，可能和你实验室计划不同。

huangcong1988

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7 _2 g% f+ L# ^  \9 q0 v% u, C9 e! T6 I6 Q) M8 r
非常感谢！我是为了浓缩慢病毒