关于PEG8000的配制问题

huangcong1988

不知道40%的PEG8000怎么配制，有的说是直接用去离子水配，也有说用去离子水配后加氯化镁，到底是怎么配制呢？而且PEG8000是用来浓缩核酸的么？

john7812x

聚乙二醇(PEG)在不同的盐溶液中可以结合形成孔径不同的网状结构,重组质粒是超螺旋的双链闭合环状DNA,它们与RNA 、线状DNA等其他杂质分子在PEG中的沉降系数不同。通过高速离心，使沉降系数较高的重组质粒DNA沉淀下来，而其他杂质分子和不同构象的质粒DNA分子被网状结构阻隔，从而纯化质粒。
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huangcong1988

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4 X; _# \7 I0 e$ k, ?6 G
哦，纯化RNA也行是吧？那40%的PEG8000该怎么配呢？

zhusealin

浓缩核酸的不太清楚。我们是用的50%PEG 1500做细胞融合用的，配的时候就用PBS溶解，高压灭菌

huangcong1988

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) j' _, X; {- E  C/ g, e是，PEG也用于细胞融合

john7812x

回复 huangcong1988 的帖子6 K/ ~' O; p& W& v

6 ^, O  c& |  Z" O; v+ q+ |PEG8000可以纯化RNA，如网页中所述：http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/16186.html! W& F7 G, P3 V* T' V
但是，我没有用过PEG8000提取RNA，我用试剂盒提取小量RNA，或用Trizol提取大量RNA。, P4 Z: m* b) a9 H# \
* {& L  b0 \$ }$ A! f
40%（w/v）PEG8000 用去离子水配，如文件中黄色部分所示：
( }1 r( S/ P" `9 z% t: Q' l% p5 d/ B7 u/ W6 v: U
. }$ ^/ \5 p: ?! }3 ?
假如你打算用PEG8000 提取RNA，建议用DEFC处理过的去离子水来配制。

huangcong1988

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# ]. h0 k, ]7 J. K. B. b& T/ h# E( D& j7 g% Y/ U9 g
不是提RNA，是浓缩，就是已经收集的慢病毒上清，想用PEG8000纯化一下，谢谢

huangcong1988

回复 john7812x 的帖子$ P# `* i3 A1 l9 h' n7 f

! J7 @- m& m$ q2 T$ u! l有道理，慢病毒上清要纯化的话呢？慢病毒是RNA+外壳（蛋白），那去离子水是应该用DEPC水处理一下

john7812x

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: v+ S1 v1 \% I2 r. B! g
, Q; e, R+ d3 t, P, ^7 w; [你是不是打算浓缩Lentivirus，来提高它的滴度, 为下步感染实验做准备?
# [# w- z9 u2 t: k! r0 {; D还是要浓缩Lentivirus 的RNA？. {& {% C6 Y0 i$ {1 N* _

. ~0 e) L7 t$ x1 E: ?) Z% n7 H: s若是为了提高病毒滴度可以超速离心的方法：
4 G! \6 X1 H! l8 x: ^
  p% W) ^/ T. _, m若是为了浓缩RNA，可以冷冻干燥，或沉淀RNA后再溶解，等等。0 w( e$ N+ ?% Y% c
. t9 L4 R4 W* g6 \
补充内容 (2011-11-1 19:54):! S2 ^/ b3 [# V" f1 G
在这个超速离心的protocol 里用的是sucrose, 没有用PEG，可能和你实验室计划不同。

huangcong1988

回复 john7812x 的帖子) A7 }  p! p0 U9 q

: W8 ?8 ?( b( G非常感谢！我是为了浓缩慢病毒