关于PEG8000的配制问题

huangcong1988

不知道40%的PEG8000怎么配制，有的说是直接用去离子水配，也有说用去离子水配后加氯化镁，到底是怎么配制呢？而且PEG8000是用来浓缩核酸的么？

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huangcong1988

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* v4 Z6 m' z5 \, {' _7 F8 y& h* ~+ O1 z& f8 k$ N2 `& w8 C1 `
文章中好像是收集慢病毒的过程吧，当然高速离心能在一定程度上提高慢病毒滴度，但是浓缩。。。

huangcong1988

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8 z: f, {7 x, @8 c) b' o$ y, ~
5 ]  T( o/ p% t+ N( q非常感谢！我是为了浓缩慢病毒

john7812x

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. N! n. |( T9 s. q
6 G/ M/ d" j+ ^0 E你是不是打算浓缩Lentivirus，来提高它的滴度, 为下步感染实验做准备?8 n9 k& F" m+ v$ d' Q
还是要浓缩Lentivirus 的RNA？
$ i$ [* k/ t: R- V$ ]# n6 D! j
, k" U* c1 R' B! ]" {若是为了提高病毒滴度可以超速离心的方法：
: M* }* a, b) y* Q. r  A, ^6 l8 d' k( W7 G7 [2 m" J' i8 l& @
若是为了浓缩RNA，可以冷冻干燥，或沉淀RNA后再溶解，等等。
" _5 y. j% u: G* z
- {% i; ~4 C- t! F补充内容 (2011-11-1 19:54):6 g- s$ `2 v- [( n4 W2 ~
在这个超速离心的protocol 里用的是sucrose, 没有用PEG，可能和你实验室计划不同。

huangcong1988

回复 john7812x 的帖子8 P0 [4 J$ R2 n" @6 y! \
) h0 d( z. v# V
有道理，慢病毒上清要纯化的话呢？慢病毒是RNA+外壳（蛋白），那去离子水是应该用DEPC水处理一下

huangcong1988

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& F$ R- w0 V/ S, [
$ [1 _1 b" l$ H9 M! ~不是提RNA，是浓缩，就是已经收集的慢病毒上清，想用PEG8000纯化一下，谢谢

john7812x

回复 huangcong1988 的帖子+ J* ^7 w- I( N6 T0 L
) w7 z) n6 |" q, ?+ H$ J. b0 M% D/ C* k
PEG8000可以纯化RNA，如网页中所述：http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/16186.html
6 k0 v7 k: I; B5 u但是，我没有用过PEG8000提取RNA，我用试剂盒提取小量RNA，或用Trizol提取大量RNA。% |4 Z/ C  c% W  K: C9 w
9 D; Z# h. s! J7 b
40%（w/v）PEG8000 用去离子水配，如文件中黄色部分所示：
$ ~$ l+ O9 w  [7 C) e  m  j+ z+ @5 l; M/ y1 e! w
( f7 v$ V$ t6 w
假如你打算用PEG8000 提取RNA，建议用DEFC处理过的去离子水来配制。

huangcong1988

回复 zhusealin 的帖子( z( q1 w& q7 O  J5 K5 g
3 n+ I3 y" F& |& D2 q+ L% V
是，PEG也用于细胞融合