关于PEG8000的配制问题

huangcong1988

不知道40%的PEG8000怎么配制，有的说是直接用去离子水配，也有说用去离子水配后加氯化镁，到底是怎么配制呢？而且PEG8000是用来浓缩核酸的么？

john7812x

聚乙二醇(PEG)在不同的盐溶液中可以结合形成孔径不同的网状结构,重组质粒是超螺旋的双链闭合环状DNA,它们与RNA 、线状DNA等其他杂质分子在PEG中的沉降系数不同。通过高速离心，使沉降系数较高的重组质粒DNA沉淀下来，而其他杂质分子和不同构象的质粒DNA分子被网状结构阻隔，从而纯化质粒。3 z+ z6 P5 {! G) D9 p

huangcong1988

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  y+ m0 B  G* [2 z, i8 m- Y$ o4 L3 L$ s: I. \; O- j% p
哦，纯化RNA也行是吧？那40%的PEG8000该怎么配呢？

zhusealin

浓缩核酸的不太清楚。我们是用的50%PEG 1500做细胞融合用的，配的时候就用PBS溶解，高压灭菌

huangcong1988

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: D0 l8 k1 }8 Q7 A. c* [/ h3 _* }- C' u6 z- U% E. I
是，PEG也用于细胞融合

john7812x

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6 m1 `/ @7 N! I/ @. U. y1 w, R+ o" E! S* _! ~/ e! U! l
PEG8000可以纯化RNA，如网页中所述：http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/16186.html
& Z3 Q) }8 ~/ J- V, j0 A但是，我没有用过PEG8000提取RNA，我用试剂盒提取小量RNA，或用Trizol提取大量RNA。
- ?8 c) ^3 M: k2 O; G3 V, o2 W; v" T. U5 U
40%（w/v）PEG8000 用去离子水配，如文件中黄色部分所示：
7 N: {& K* P! ?9 d$ {
8 f) S$ g6 |$ j: ^% A8 Q4 D! Q1 F1 H' g9 |) ]2 B
假如你打算用PEG8000 提取RNA，建议用DEFC处理过的去离子水来配制。

huangcong1988

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' w0 p% X( a3 [* ]8 r/ L4 Z8 ?8 ]8 J7 @2 C4 z% x
不是提RNA，是浓缩，就是已经收集的慢病毒上清，想用PEG8000纯化一下，谢谢

huangcong1988

回复 john7812x 的帖子& @2 M5 j) F; l& \# r

" N$ w# R1 E2 C- m' H3 Z3 v% ^( [有道理，慢病毒上清要纯化的话呢？慢病毒是RNA+外壳（蛋白），那去离子水是应该用DEPC水处理一下

john7812x

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4 z) R0 @8 q+ q2 |+ {/ y
8 @- t: k) g3 {+ A8 v你是不是打算浓缩Lentivirus，来提高它的滴度, 为下步感染实验做准备?
; I! |  m. ?+ {" ^+ _. C还是要浓缩Lentivirus 的RNA？
* L; y' ?1 [9 u3 S
0 h0 u2 d& k. K( u/ V, |若是为了提高病毒滴度可以超速离心的方法：
7 N5 Z! k$ g3 }  R' g5 X, f  U" b4 H$ o/ O
若是为了浓缩RNA，可以冷冻干燥，或沉淀RNA后再溶解，等等。7 ?5 @0 z7 M' z  t7 f  I
  L9 D6 P! E4 X  ^& l1 k
补充内容 (2011-11-1 19:54):
% p" R2 j, C; _( i3 h在这个超速离心的protocol 里用的是sucrose, 没有用PEG，可能和你实验室计划不同。

huangcong1988

回复 john7812x 的帖子) K  p3 d( o1 `

* h' S! Z* p( |9 x非常感谢！我是为了浓缩慢病毒