关于PEG8000的配制问题

huangcong1988

不知道40%的PEG8000怎么配制，有的说是直接用去离子水配，也有说用去离子水配后加氯化镁，到底是怎么配制呢？而且PEG8000是用来浓缩核酸的么？

john7812x

聚乙二醇(PEG)在不同的盐溶液中可以结合形成孔径不同的网状结构,重组质粒是超螺旋的双链闭合环状DNA,它们与RNA 、线状DNA等其他杂质分子在PEG中的沉降系数不同。通过高速离心，使沉降系数较高的重组质粒DNA沉淀下来，而其他杂质分子和不同构象的质粒DNA分子被网状结构阻隔，从而纯化质粒。$ f# ^% y3 ?+ F4 d: c% ?  h2 ^' D9 e

huangcong1988

回复 john7812x 的帖子. ]6 \6 c. B7 j' n5 t3 F- ]
3 i% x2 w# @' j3 u! v
哦，纯化RNA也行是吧？那40%的PEG8000该怎么配呢？

zhusealin

浓缩核酸的不太清楚。我们是用的50%PEG 1500做细胞融合用的，配的时候就用PBS溶解，高压灭菌

huangcong1988

回复 zhusealin 的帖子6 Q) i: v& l9 H# R2 P
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是，PEG也用于细胞融合

john7812x

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& T& J9 ^( D1 c) ?( l: n, M3 M" c$ e. @* h. D
PEG8000可以纯化RNA，如网页中所述：http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/16186.html2 m  N! }% Y' w9 ]% w
但是，我没有用过PEG8000提取RNA，我用试剂盒提取小量RNA，或用Trizol提取大量RNA。
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40%（w/v）PEG8000 用去离子水配，如文件中黄色部分所示：
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9 K  u7 a6 t4 @' L. ^; X9 i) m9 M' t
假如你打算用PEG8000 提取RNA，建议用DEFC处理过的去离子水来配制。

huangcong1988

回复 john7812x 的帖子. b! Q( ?( [8 q" j4 t# i

9 G, ?- U/ K' P2 u( [不是提RNA，是浓缩，就是已经收集的慢病毒上清，想用PEG8000纯化一下，谢谢

huangcong1988

回复 john7812x 的帖子% w1 N0 {) b8 n* ^$ K  m: G3 E  G
1 t; ^- F; v! E: R% K! u: q
有道理，慢病毒上清要纯化的话呢？慢病毒是RNA+外壳（蛋白），那去离子水是应该用DEPC水处理一下

john7812x

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0 c0 f/ }; y6 u! v  n2 V" A0 c( d6 \+ u- f9 v+ x$ W4 S
你是不是打算浓缩Lentivirus，来提高它的滴度, 为下步感染实验做准备?
' }. \9 F* J1 N1 g; p) O还是要浓缩Lentivirus 的RNA？: p* S1 j1 D* |7 O, g

6 s- {: }5 ^  F& R/ s4 m若是为了提高病毒滴度可以超速离心的方法：
0 D" g9 H) }0 E8 b
; J% y5 Z2 J0 U+ l9 Q# x若是为了浓缩RNA，可以冷冻干燥，或沉淀RNA后再溶解，等等。  g! M: A; ~/ j' g9 J

- O9 S+ M$ E" K+ }& A( `补充内容 (2011-11-1 19:54):
6 ~' O. L! g- Y, L% [7 a( {& ]- Q在这个超速离心的protocol 里用的是sucrose, 没有用PEG，可能和你实验室计划不同。

huangcong1988

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: f/ q9 ~$ h  |/ C. P/ h1 C
" y' F- Q* h5 A非常感谢！我是为了浓缩慢病毒