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本帖最后由 henryjia 于 2011-12-2 08:04 编辑 3 o/ G, Q, [7 T* h
8 |( T2 U% V1 }% M1 }& ^做脐带间充质干细胞的分离有差不多1年了，在此分享一下自己的经验，同时，抛砖引玉，希望大家多提宝贵意见，以完善这个主题研究信息。
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先说细胞分离：比对很对方法后，感觉I型胶原酶联合透明质酸酶消化最理想。但是仍然个体差异性非常明显。 而且这个方法不能过扩展到脐带动静血管的消化。
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其次，消化法时掌握不好消化时间，看文献有的说消化过夜，有的说6h的。一直不成功，仍然个体差异性非常明显。过夜消化似乎对细胞损害很大，不知道添加少量血清是否有保护作用。
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' E7 v; B( d8 Q1 C- J9 x( b, D( r4 e' r培养基：使用含10%血清的骨髓MSC相同培养基，发现很快（3代左右）细胞老化明显，及时添加bFGF也不能阻止。
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传代：一直使用0.25%胰酶加EDTA（SIGMA），必须要用含血清培养基中和。感觉效果还行。同样有不少细胞贴壁很难弄下来。请问，这部分细胞是不是干细胞？要还是不要呢？' T( @0 a6 W. q8 ]4 J' n: Y6 ]( |
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多分化潜能的功能测试：这是最头痛的，与骨髓MSC相比，结果简直就是成纤维细胞，根本不像MSC。即使之前FACS表面抗原CD90,CD105, VACAM与MSC很接近。 成脂成骨作用很弱，不知道大火的结果如何？真如报道的那么好吗？我怎么做不出来？
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附上我的细胞照片： I2 T2 ?* M% _& }0 g" _# F
图1是直接贴壁' |+ S3 J; F( `. t
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图2是酶消化/ a* Y6 e; P2 e* ~& Y1 p" D
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图3， 是否是平滑肌细胞呢？ 这是我从期待静脉内层剥离的组织消化培养出来的。& e, j6 T4 Y- {) V) s
感觉当时是有华通胶混杂其中，但是细胞形态均一。很奇怪。最初目的是分离脐静脉平滑肌细胞。/ l6 j3 c0 x0 @# ?# A$ K% t
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发表于 2011-12-2 08:03
