|
- 积分
- 204
- 威望
- 204
- 包包
- 2957
|
1.染色液的配制:
. X e: O6 E: P材料：油红染料 棕色可密封瓶 异丙醇 研钵 漏斗 定性滤纸
& K9 ]6 \8 L0 {7 Y称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封（或锡箔纸包裹避光）4℃保存，为储存液，可长期保存。用时取6ml加三蒸水4ml混匀，定性滤纸过滤，稀释后数小时内用完。
+ ]! t7 w) i3 s5 F% m3 `2.10%中性甲醛的配制8 [9 S7 {) ]7 [) J( y' r: M
材料：中性甲醛（多聚甲醛） 密封瓶! k' @/ P q8 i% H
称取1g中性甲醛粉末，加入10ml的三蒸水中，密封，在60度水浴中过夜才能溶解。配好的溶液1个星期内有效，最好4度保存。! x. ]5 J9 B. }* N
3.染色对象 间充质细胞脂肪诱导后不同时间段。
. R4 w8 B; @8 m6 X5 ?3 r4.培养载体 3毫升培养瓶。如果培养载体为塑料制品，hoechst33342染核的话，塑料板自发荧光也为蓝色，必须考虑。
; S. P! x9 l- j* z+ ?( |5.染色步骤：
8 y2 N9 C- d+ _* Y5.1 先小心轻缓倒去培养夜。
7 C- A1 W& b3 t- C! P, b7 c" ~5.2 用pbs轻缓漂洗（不洗没问题）。: ?8 G* o) K9 O6 I) V. F) f. z; G5 h
5.3 加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可）。固定的是细胞膜。- N( w m2 Z! E- ^8 n2 W
5.4 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min（除去一些杂质，染色结果更清晰）。+ r9 @0 c ~, O5 d% Q; W- p
5.5 染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）。
# g" ?5 e z1 i3 t5.6 脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少）。
$ X3 e! A$ o; h" s8 _) h5.7 复染，淡苏木染色1/5分钟，pbs漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）。
1 } ]8 y- ~" p2 O; I5.8甘油明胶封片（封片后可长期保存）。
( P& \9 {4 Z) X$ |! z5.9 显微镜观察。 |
-
总评分: 威望 + 2
包包 + 10
查看全部评分
|
发表于 2012-1-10 09:35
发表于 2012-1-10 10:09
