慢病毒包装质粒 能否共用？

刘森泉

向各位请教：慢病毒包装质粒是否能共用？我之前用公司买的慢病毒包装体系里面带的包装质粒包（pCMV-VSVG和8.91）慢病毒，不成功，但是我用了师姐的那三个包装质粒（PL1/2和VSVG）试了下，竟然包出来了。由于不是做分子这方面的不是很懂，想问下这到底取决于什么，只需要HIV病毒的几个部件齐全就可以包慢病毒吗？那到底怎么看呢？谢谢！

lm1982

回复 xiongjiedeng 的帖子# O0 e# d9 H0 D7 n
, n/ s2 O8 b8 a# m
xiongjiedeng，您好，谢谢您提供的详细步骤，想请教一下HBS和2M Cacl2的灭菌方法，高压还是过滤呢，谢谢

l_hu

最后提供一篇参考文献，详细描述了慢病毒质粒系统。感兴趣的同好可以阅读参考。

l_hu

另外，解释一下慢病毒和逆转录病毒的不同。慢病毒是逆转录病毒的一个亚类。主要的不同就是慢病毒可以感染几乎所有的活细胞，不论细胞是否处于增殖分裂期，而逆转录病毒仅能感染处于增殖分裂期的细胞。
1 c* P2 N* ^( R慢病毒和逆转录病毒包装都需要gag/pol和包膜基因等，但由于慢病毒的这些基因和逆转录病毒的这些基因编码的蛋白构象不一样，两套包装系统是不可以混用的。

l_hu

. f5 `2 Q+ A1 h. r% M2 O9 f
; h0 s8 G2 X6 J8 ^& \# U9 {2 ?4 p慢病毒主要由包膜（envelop）、蛋白质膜（capsid）以及遗传物质组成。慢病毒感染细胞时，会将其内部的基因注入细胞内，并由于其基因组内的LTR序列，其基因可以嵌入宿主基因组中而稳定表达。利用这一原理，人们开发了慢病毒质粒系统。病毒包装系统主要有几个质粒组成，包括构成包膜的VSVG，病毒结构蛋白gag/pol，rev等等。+ B$ \8 A$ D# T- }* x  L
慢病毒包装系统一般由包膜质粒和包装质粒构成。包膜质粒大同小异，都编码VSVG，根据包装质粒的不同，可分为3代：; V) u& L- ~9 G* Q
第一代包装质粒由含有所有的调节和辅助基因。如gag/pol, tat, rev, vif, vpr, vpu, nef等。因为其安全性较低，目前已被淘汰；/ Z1 u- b( F! m2 c: G! f
第二代包装质粒就是在第一代的基础上去掉了所有不相关的调节基因，仅含有gag/pol, tat, rev。大大提高了安全性，而且不影响感染效率和病毒滴度，是目前最为常用的慢病毒包装系统；如pCMV delta 8.91；
7 C" d# y+ D9 Z: {1 i* j第三代包装质粒在第二代的基础上基因了进一步改进，用强启动子直接表达rev，无需tat基因调节，将第二代的一个包装质粒分为两个。因此，第三代包装系统有仅含有慢病毒9个基因中的3个，相较于第二代的4个更加安全。这也是楼主用的另一个包装系统。但是由于包装病毒需要同时转染4个质粒（3个包装质粒，1个基因），效率可能有所降低。

yuanyecat

可以共用的，这个慢病毒都是类似的

孤野知—少帅

回复 细胞海洋 的帖子2 K7 X, @5 b7 g( r- s& V  v
5 @. o, ^/ T7 I2 I9 k
6 b$ r! l+ \" F( S7 h. x# o
我是想请教 xiongjiedeng ，所以重新发帖他不一定看得到

细胞海洋

回复 孤野知—少帅 的帖子
# t$ U- V! |$ ~" |
& Z' v; T5 M% {) n建议你发新帖提问

孤野知—少帅

回复 xiongjiedeng 的帖子7 X- J: M- ^- a- x3 L0 F" @, D

4 g2 {/ `+ y, I请教：我们实验室用pVSVG+delta8.91包装慢病毒是直接三质粒共转，没有用磷酸钙哎，HBS和Cacl2我们都没有用，也能包出来，这两者有什么区别吗？

chenhuachen

小弟现在做p53对转化细胞代谢的影响，急求TET四环素诱导的wt-p53质粒，对接下来的实验非常重要，跪求论坛里的园友谁有这个质粒，可否赠小弟一点，不胜感激！
- L: j5 |6 U3 R6 J" T1 L6 L* H+ G人的或者大鼠的野生型p53都可以。