关于饲养层细胞制作

yuhaoze

这两天正忙活小鼠MEF细胞，在 懵懂干细胞 的大力帮助下，终于建立起4批了。但其中有2只老鼠并没有严格按照12.5-14.5天的教科书式的实验步骤，而是请养动物的师傅按照肚子大小来粗略估计的。) F2 F) r9 K* \; v
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有一直孕鼠肚子里的3只胚胎，都非常大了， 胳膊腿都不太好往下拽，后背的皮肤还有点儿硬邦邦的，我还看到白色的类似骨头的东西，消化完了放到培养瓶，8小时之后观察，有很多细胞死的，比发育程度小的胚胎死得多很多，但也有部分细胞贴壁了，也在生长分裂，形态与MEF很相似。3 G$ }3 l! H- F5 V! P
我有一个问题，为什么必须要12.5-14.5天的，有没有相关的文献，或者前辈们有没有经验，那些用非12.5-14.5天胚鼠建立起来的饲养层细胞，对ips或ES的生长有没有不良的影响？
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# @: W2 z+ T' ?6 t: \: S补充内容 (2012-3-5 16:18):3 p0 \* R; [6 ]" b. J$ \
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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补充内容 (2012-3-5 16:18):- d2 I3 u$ i( `5 s. e
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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! e. r$ W3 o! E9 D7 }补充内容 (2012-3-5 16:18):
7 U$ {/ s, V7 b( }- Y: J还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！  F: T! n6 a! X* [# C. H, e* }

- ?% h9 I7 v3 ]8 g! p5 H0 r补充内容 (2012-3-5 16:18):, H" u9 S% ~3 y' m9 X7 N
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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& |+ i& b5 \' z3 G补充内容 (2012-3-5 16:18):
7 _+ k3 Q) m3 D' H  a& }" H还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！

song58

请问，一只孕鼠怀了多少胎鼠？看胚胎大小，如果不是因为只有3～4个胎鼠的话，感觉至少是14天以上的了...
$ T* H. m. J, K3 W. g3 {% n还有，LZ进行原代细胞分离都不带个手套么，也不怕污染...

yuhaoze

回复 song58 的帖子
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2 S' \- @( Q/ D嘻嘻，从来没带过手套，太贵了。我倒是害怕老鼠不干净~~2 h9 |1 R4 E) j2 h  ^5 h# F
我觉得这胚鼠是不小了，这窝就3只

song58

回复 yuhaoze 的帖子3 p9 `2 b4 Q8 U8 m

1 H4 X  z; A% O9 T6 d: c$ [" s你们老板连手套都要省啊...太大的胎鼠做成MEF以后感觉细胞状态不太好，长的慢

yuhaoze

晕，网不好，点了这么多次

receiver1

第二张图，你那胚胎也太大了，呵呵，感觉再过一两天就快出生了。取13.5天的胚胎做吧（胚胎很小的！如果肉眼看起来困难，可以放体视镜下操作），把头、尾、四肢和内脏（红色的一团）去掉，消化成单细胞接种，平均1胚胎的细胞接种到2个10cm皿，细胞长的很快。13.5天的胚胎，杂细胞最少！
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, g7 L, N+ N9 d; G  A( d3 \# r/ Q另外，消化的时候，别消化的太厉害把细胞消化死了，呵呵。其实，MEF很好做的。
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戴手套吧，别污染了，就白忙活了，记得加2X双抗。
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- R3 z1 ]* Q. nMMC处理后大约三四天后会慢慢出现死细胞，一周左右大量死亡，但有些细胞能坚持到2周及以后。

yuhaoze

回复 receiver1 的帖子' J& K( S0 d4 k/ D- u

5 o: J5 Y: K: F8 L9 ~+ r谢谢！ 过两天MMC来了就处理看看

jessewill

MEF经过MMC处理之后，没有DNA复制能力了，但是怎么会一直在那里不死呢。。。？？？* c  `! I8 ^9 @2 r; c! u. G# M4 Y
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到了衰老的寿命也要死啊。。。。。。一般一个星期内用，3天左右最好。

xiangchou812

为什么这么强调带手套呢？2 j$ b( z: S! p/ J1 c" ^
戴手套就能避免污染了？这毕竟不是主要的。

yuhaoze

回复 xiangchou812 的帖子
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