关于饲养层细胞制作

yuhaoze

这两天正忙活小鼠MEF细胞，在 懵懂干细胞 的大力帮助下，终于建立起4批了。但其中有2只老鼠并没有严格按照12.5-14.5天的教科书式的实验步骤，而是请养动物的师傅按照肚子大小来粗略估计的。& Y' ^' f8 W9 y

) u" d( P  v5 Y6 i6 L5 F# ~5 \2 l有一直孕鼠肚子里的3只胚胎，都非常大了， 胳膊腿都不太好往下拽，后背的皮肤还有点儿硬邦邦的，我还看到白色的类似骨头的东西，消化完了放到培养瓶，8小时之后观察，有很多细胞死的，比发育程度小的胚胎死得多很多，但也有部分细胞贴壁了，也在生长分裂，形态与MEF很相似。+ D- t; T2 G( E% K
我有一个问题，为什么必须要12.5-14.5天的，有没有相关的文献，或者前辈们有没有经验，那些用非12.5-14.5天胚鼠建立起来的饲养层细胞，对ips或ES的生长有没有不良的影响？
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
0 u# Y. j# k# H+ |/ k$ A还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！! f% k) w" Y' R( J# U0 r
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
, h8 y0 T4 |! X( B. M% e" Y还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！, W2 z: g1 Y6 E  L! \! F4 R

3 i8 g1 T- N) X. J* w0 T8 y补充内容 (2012-3-5 16:18):
$ e& N1 i6 ^2 }, i7 J; q6 I% U4 x还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！+ v  `! p8 z* o

6 L! k9 y& h& T# Z, y补充内容 (2012-3-5 16:18):3 ~% c8 s4 }  R" W: h& i& I) A
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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2 R" \" l3 b- h% K" f6 \补充内容 (2012-3-5 16:18):
& s# K' s+ w- y3 `. c8 I还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
* E9 q* D& R7 G' s还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！

song58

请问，一只孕鼠怀了多少胎鼠？看胚胎大小，如果不是因为只有3～4个胎鼠的话，感觉至少是14天以上的了...
( c; f5 {7 o- ~8 S# }5 Y还有，LZ进行原代细胞分离都不带个手套么，也不怕污染...

yuhaoze

回复 song58 的帖子
& `+ _5 o. n# v3 W8 s7 O' S* m+ X% X0 s4 @) J- N, g
嘻嘻，从来没带过手套，太贵了。我倒是害怕老鼠不干净~~
$ D( e' y. F# @8 h, n7 U) \2 H我觉得这胚鼠是不小了，这窝就3只

song58

回复 yuhaoze 的帖子
$ Y8 L4 Y$ Y! _0 ?: y6 K
3 u5 h) n8 N) h4 D3 g; V/ B你们老板连手套都要省啊...太大的胎鼠做成MEF以后感觉细胞状态不太好，长的慢

yuhaoze

晕，网不好，点了这么多次

receiver1

第二张图，你那胚胎也太大了，呵呵，感觉再过一两天就快出生了。取13.5天的胚胎做吧（胚胎很小的！如果肉眼看起来困难，可以放体视镜下操作），把头、尾、四肢和内脏（红色的一团）去掉，消化成单细胞接种，平均1胚胎的细胞接种到2个10cm皿，细胞长的很快。13.5天的胚胎，杂细胞最少！2 r5 W! m0 z5 G1 X8 X  O" ^. V
1 R. e3 U4 G9 B* e3 B
另外，消化的时候，别消化的太厉害把细胞消化死了，呵呵。其实，MEF很好做的。! ?( i3 c9 L2 ]2 T. ]; a. m; x4 a

3 ~/ h6 t' v+ }4 M6 ]戴手套吧，别污染了，就白忙活了，记得加2X双抗。# l1 R" S5 ]# [9 }4 v

0 C" G6 K8 H' v0 k2 r( m* x* UMMC处理后大约三四天后会慢慢出现死细胞，一周左右大量死亡，但有些细胞能坚持到2周及以后。

yuhaoze

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3 Y+ V" `. n! O0 V! D) F! L
5 I: O7 @5 K: r) B- L: o8 J谢谢！ 过两天MMC来了就处理看看

jessewill

MEF经过MMC处理之后，没有DNA复制能力了，但是怎么会一直在那里不死呢。。。？？？
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到了衰老的寿命也要死啊。。。。。。一般一个星期内用，3天左右最好。

xiangchou812

为什么这么强调带手套呢？
0 h0 R2 `- B( p' U9 J8 R0 D戴手套就能避免污染了？这毕竟不是主要的。

yuhaoze

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1 H) m, f  S  P# k2 [1 |/ [$ B* @# L* j2 z
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