关于饲养层细胞制作

yuhaoze

这两天正忙活小鼠MEF细胞，在 懵懂干细胞 的大力帮助下，终于建立起4批了。但其中有2只老鼠并没有严格按照12.5-14.5天的教科书式的实验步骤，而是请养动物的师傅按照肚子大小来粗略估计的。7 I3 E, U+ |) k) {0 a
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有一直孕鼠肚子里的3只胚胎，都非常大了， 胳膊腿都不太好往下拽，后背的皮肤还有点儿硬邦邦的，我还看到白色的类似骨头的东西，消化完了放到培养瓶，8小时之后观察，有很多细胞死的，比发育程度小的胚胎死得多很多，但也有部分细胞贴壁了，也在生长分裂，形态与MEF很相似。
; B6 E! W  P, Y  d5 B我有一个问题，为什么必须要12.5-14.5天的，有没有相关的文献，或者前辈们有没有经验，那些用非12.5-14.5天胚鼠建立起来的饲养层细胞，对ips或ES的生长有没有不良的影响？
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
* u8 i7 y: N4 t$ K0 n还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！, k! E; E* E8 }% S! j; Q
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补充内容 (2012-3-5 16:18):1 y* n( A# g* \
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！  |. J9 d/ `0 R  m+ ~& W) u( Y
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
2 l7 [4 y5 a% N还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
; X8 s- x; r' E, n) T还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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9 N& K$ ^/ b# _; J5 Q2 g! W- V补充内容 (2012-3-5 16:18):
5 ]- i2 S: a3 F  n3 u3 R/ i还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！  O" z# h; H6 M2 _  u7 x* V
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
7 ?9 I0 f4 i& w( S( [9 N还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！

song58

请问，一只孕鼠怀了多少胎鼠？看胚胎大小，如果不是因为只有3～4个胎鼠的话，感觉至少是14天以上的了...   K& x% B+ Y% K3 d% \
还有，LZ进行原代细胞分离都不带个手套么，也不怕污染...

yuhaoze

回复 song58 的帖子
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嘻嘻，从来没带过手套，太贵了。我倒是害怕老鼠不干净~~
, A& G8 v% w3 I' W+ f我觉得这胚鼠是不小了，这窝就3只

song58

回复 yuhaoze 的帖子1 I* u9 g2 r6 n. ^1 U, j

  s* I8 M1 r5 |你们老板连手套都要省啊...太大的胎鼠做成MEF以后感觉细胞状态不太好，长的慢

yuhaoze

晕，网不好，点了这么多次

receiver1

第二张图，你那胚胎也太大了，呵呵，感觉再过一两天就快出生了。取13.5天的胚胎做吧（胚胎很小的！如果肉眼看起来困难，可以放体视镜下操作），把头、尾、四肢和内脏（红色的一团）去掉，消化成单细胞接种，平均1胚胎的细胞接种到2个10cm皿，细胞长的很快。13.5天的胚胎，杂细胞最少！6 q) F# v( s8 W
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另外，消化的时候，别消化的太厉害把细胞消化死了，呵呵。其实，MEF很好做的。% t2 f* h! Z- G9 j
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戴手套吧，别污染了，就白忙活了，记得加2X双抗。3 L) n9 s& g" k- i) B. \* `+ \3 _

: m* d& v4 {, z+ U4 B( C4 }9 u; N7 u2 pMMC处理后大约三四天后会慢慢出现死细胞，一周左右大量死亡，但有些细胞能坚持到2周及以后。

yuhaoze

回复 receiver1 的帖子
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谢谢！ 过两天MMC来了就处理看看

jessewill

MEF经过MMC处理之后，没有DNA复制能力了，但是怎么会一直在那里不死呢。。。？？？
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到了衰老的寿命也要死啊。。。。。。一般一个星期内用，3天左右最好。

xiangchou812

为什么这么强调带手套呢？
; U- X9 k/ _7 I戴手套就能避免污染了？这毕竟不是主要的。

yuhaoze

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