关于饲养层细胞制作

yuhaoze

这两天正忙活小鼠MEF细胞，在 懵懂干细胞 的大力帮助下，终于建立起4批了。但其中有2只老鼠并没有严格按照12.5-14.5天的教科书式的实验步骤，而是请养动物的师傅按照肚子大小来粗略估计的。
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7 d6 d# m, T' K7 S% y/ C; _; Z8 ]有一直孕鼠肚子里的3只胚胎，都非常大了， 胳膊腿都不太好往下拽，后背的皮肤还有点儿硬邦邦的，我还看到白色的类似骨头的东西，消化完了放到培养瓶，8小时之后观察，有很多细胞死的，比发育程度小的胚胎死得多很多，但也有部分细胞贴壁了，也在生长分裂，形态与MEF很相似。
! t/ c0 L0 G0 ], [我有一个问题，为什么必须要12.5-14.5天的，有没有相关的文献，或者前辈们有没有经验，那些用非12.5-14.5天胚鼠建立起来的饲养层细胞，对ips或ES的生长有没有不良的影响？3 Y" \7 D( }$ V
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
$ [: K: `: T/ m8 Z( T# ]! C! y还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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/ v( @+ U% |7 z. P补充内容 (2012-3-5 16:18):
2 s" O/ r( G* [1 P3 E5 p- m还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！# d' w+ ^- p4 M) b
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补充内容 (2012-3-5 16:18):7 s3 G# W" B' O' P  \9 W6 @. R
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！; J' E; u" U9 G4 ^( g) ?5 b; K
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
! _, ~6 e0 \6 j. c. P$ d( A还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！! G1 s2 J4 S2 K4 {6 c+ y! P
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补充内容 (2012-3-5 16:18):! s4 l* m! Q! p9 B
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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补充内容 (2012-3-5 16:18):, V5 T" k7 P2 O* ^3 F  U* P6 l
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！

song58

请问，一只孕鼠怀了多少胎鼠？看胚胎大小，如果不是因为只有3～4个胎鼠的话，感觉至少是14天以上的了...
9 G: f" {- V3 L, K" a$ Y$ m还有，LZ进行原代细胞分离都不带个手套么，也不怕污染...

yuhaoze

回复 song58 的帖子' C3 d2 w) q& V" S! A
' T7 G+ z8 Y+ j. z6 I+ B
嘻嘻，从来没带过手套，太贵了。我倒是害怕老鼠不干净~~
+ R/ j5 f6 `) g7 M3 }. ^4 ~7 Z$ _我觉得这胚鼠是不小了，这窝就3只

song58

回复 yuhaoze 的帖子
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: X5 T# t6 Z3 _+ k: \6 H2 ~你们老板连手套都要省啊...太大的胎鼠做成MEF以后感觉细胞状态不太好，长的慢

yuhaoze

晕，网不好，点了这么多次

receiver1

第二张图，你那胚胎也太大了，呵呵，感觉再过一两天就快出生了。取13.5天的胚胎做吧（胚胎很小的！如果肉眼看起来困难，可以放体视镜下操作），把头、尾、四肢和内脏（红色的一团）去掉，消化成单细胞接种，平均1胚胎的细胞接种到2个10cm皿，细胞长的很快。13.5天的胚胎，杂细胞最少！
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另外，消化的时候，别消化的太厉害把细胞消化死了，呵呵。其实，MEF很好做的。
* z/ Y- e, G! H, }7 y) u* C# \2 H7 t* ?. w: C, G3 O
戴手套吧，别污染了，就白忙活了，记得加2X双抗。
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MMC处理后大约三四天后会慢慢出现死细胞，一周左右大量死亡，但有些细胞能坚持到2周及以后。

yuhaoze

回复 receiver1 的帖子
  o( g4 O) t& z( A# q  T9 }
& L3 g$ |+ V6 W; p6 z3 K% J谢谢！ 过两天MMC来了就处理看看

jessewill

MEF经过MMC处理之后，没有DNA复制能力了，但是怎么会一直在那里不死呢。。。？？？
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( Y! ]. t. h  a6 Z( k1 X* x到了衰老的寿命也要死啊。。。。。。一般一个星期内用，3天左右最好。

xiangchou812

为什么这么强调带手套呢？
& \3 L  \- N/ ?. ~0 c' ?' ^: `戴手套就能避免污染了？这毕竟不是主要的。

yuhaoze

回复 xiangchou812 的帖子* ?; M# ^' t9 `

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