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关于饲养层细胞制作     [复制链接]

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楼主
发表于 2012-3-5 15:51 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
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这两天正忙活小鼠MEF细胞,在 懵懂干细胞 的大力帮助下,终于建立起4批了。但其中有2只老鼠并没有严格按照12.5-14.5天的教科书式的实验步骤,而是请养动物的师傅按照肚子大小来粗略估计的。
. K6 \1 m; m3 f" o) \
# h9 G% ?, J( N$ W有一直孕鼠肚子里的3只胚胎,都非常大了, 胳膊腿都不太好往下拽,后背的皮肤还有点儿硬邦邦的,我还看到白色的类似骨头的东西,消化完了放到培养瓶,8小时之后观察,有很多细胞死的,比发育程度小的胚胎死得多很多,但也有部分细胞贴壁了,也在生长分裂,形态与MEF很相似。8 D1 k' K. F! H+ x
我有一个问题,为什么必须要12.5-14.5天的,有没有相关的文献,或者前辈们有没有经验,那些用非12.5-14.5天胚鼠建立起来的饲养层细胞,对ips或ES的生长有没有不良的影响?! N. k2 l5 g2 ?

' e6 j# _' M0 C# a' u4 g补充内容 (2012-3-5 16:18):" h7 e$ |  u! L& S& |4 i; l6 s
还有一个问题,就是MEF经过MMC处理之后停止分裂,会一直贴在哪里不死吗?最后MEF就怎样了? 谢谢!$ v' F! r" K1 w' l$ m0 B4 s5 q

6 y- m* h. ~/ d& q, M补充内容 (2012-3-5 16:18):
7 p. ~- i- E: U. A6 y8 M% `还有一个问题,就是MEF经过MMC处理之后停止分裂,会一直贴在哪里不死吗?最后MEF就怎样了? 谢谢!4 J) R; ?2 b" m1 R6 t- }
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补充内容 (2012-3-5 16:18):" {: O8 T2 _, F8 A5 p
还有一个问题,就是MEF经过MMC处理之后停止分裂,会一直贴在哪里不死吗?最后MEF就怎样了? 谢谢!
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补充内容 (2012-3-5 16:18):0 h2 v  q" V6 A+ T0 Q
还有一个问题,就是MEF经过MMC处理之后停止分裂,会一直贴在哪里不死吗?最后MEF就怎样了? 谢谢!
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, ~1 s$ R* v' [) i还有一个问题,就是MEF经过MMC处理之后停止分裂,会一直贴在哪里不死吗?最后MEF就怎样了? 谢谢!
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
' v0 N# K; q5 T还有一个问题,就是MEF经过MMC处理之后停止分裂,会一直贴在哪里不死吗?最后MEF就怎样了? 谢谢!
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沙发
发表于 2012-3-5 16:04 |只看该作者
请问,一只孕鼠怀了多少胎鼠?看胚胎大小,如果不是因为只有3~4个胎鼠的话,感觉至少是14天以上的了... + f7 O: [9 ~4 r# ^
还有,LZ进行原代细胞分离都不带个手套么,也不怕污染...
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藤椅
发表于 2012-3-5 16:13 |只看该作者
回复 song58 的帖子
. R4 B: o8 _$ q- y8 ^. f# m" Z& H7 ~2 X2 `/ a/ Z# b- x( ?
嘻嘻,从来没带过手套,太贵了。我倒是害怕老鼠不干净~~
% a# m2 N" U' m我觉得这胚鼠是不小了,这窝就3只
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板凳
发表于 2012-3-5 16:19 |只看该作者
回复 yuhaoze 的帖子
$ k8 X; p' r5 ?& [0 h7 [0 M
- I* h% z8 \& [, }2 |2 t) S. x你们老板连手套都要省啊...太大的胎鼠做成MEF以后感觉细胞状态不太好,长的慢
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报纸
发表于 2012-3-5 16:19 |只看该作者
晕,网不好,点了这么多次

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地板
发表于 2012-3-5 17:51 |只看该作者
第二张图,你那胚胎也太大了,呵呵,感觉再过一两天就快出生了。取13.5天的胚胎做吧(胚胎很小的!如果肉眼看起来困难,可以放体视镜下操作),把头、尾、四肢和内脏(红色的一团)去掉,消化成单细胞接种,平均1胚胎的细胞接种到2个10cm皿,细胞长的很快。13.5天的胚胎,杂细胞最少!
. h5 N3 D5 |) g0 ~- m
# u3 r! G$ n6 Q+ s9 z! h+ k另外,消化的时候,别消化的太厉害把细胞消化死了,呵呵。其实,MEF很好做的。
. @- H0 x( q8 |9 u8 d4 W9 R; F: `" U5 \9 Z* C  {1 l
戴手套吧,别污染了,就白忙活了,记得加2X双抗。
* o# f' ?, G. m+ |7 r8 w8 d# u8 E
MMC处理后大约三四天后会慢慢出现死细胞,一周左右大量死亡,但有些细胞能坚持到2周及以后。
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发表于 2012-3-5 18:05 |只看该作者
回复 receiver1 的帖子  ?* a' Y+ B. E- Q, O, y

) k, N8 q- H! B* c) @( M& d. S谢谢! 过两天MMC来了就处理看看

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发表于 2012-3-5 19:33 |只看该作者
MEF经过MMC处理之后,没有DNA复制能力了,但是怎么会一直在那里不死呢。。。???
3 b/ I* [- a" @+ h
* W+ r. y7 l; R3 j到了衰老的寿命也要死啊。。。。。。一般一个星期内用,3天左右最好。
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发表于 2012-3-5 19:46 |只看该作者
为什么这么强调带手套呢?4 r5 n" A* i2 I* _: P  z8 w
戴手套就能避免污染了?这毕竟不是主要的。
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发表于 2012-3-5 20:08 |只看该作者
回复 xiangchou812 的帖子
; {0 a/ ?2 i$ c8 D  G. F, N# e8 P7 Z6 s7 C9 e0 H: T
:D:D:D:D
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