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关于饲养层细胞制作     [复制链接]

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楼主
发表于 2012-3-5 15:51 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
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这两天正忙活小鼠MEF细胞,在 懵懂干细胞 的大力帮助下,终于建立起4批了。但其中有2只老鼠并没有严格按照12.5-14.5天的教科书式的实验步骤,而是请养动物的师傅按照肚子大小来粗略估计的。
7 O0 q4 s. T6 m( ~, }( T: f
4 R6 L  p4 z3 U- Z+ y! V9 A有一直孕鼠肚子里的3只胚胎,都非常大了, 胳膊腿都不太好往下拽,后背的皮肤还有点儿硬邦邦的,我还看到白色的类似骨头的东西,消化完了放到培养瓶,8小时之后观察,有很多细胞死的,比发育程度小的胚胎死得多很多,但也有部分细胞贴壁了,也在生长分裂,形态与MEF很相似。
9 K3 e- t, |/ ~) b; d) K& J8 p我有一个问题,为什么必须要12.5-14.5天的,有没有相关的文献,或者前辈们有没有经验,那些用非12.5-14.5天胚鼠建立起来的饲养层细胞,对ips或ES的生长有没有不良的影响?
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补充内容 (2012-3-5 16:18):% |( P5 G0 \. Y% t4 A
还有一个问题,就是MEF经过MMC处理之后停止分裂,会一直贴在哪里不死吗?最后MEF就怎样了? 谢谢!
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2 `3 @0 f; q; E- j补充内容 (2012-3-5 16:18):3 C8 C7 V! t, f' p$ i" J2 d% L
还有一个问题,就是MEF经过MMC处理之后停止分裂,会一直贴在哪里不死吗?最后MEF就怎样了? 谢谢!9 [8 O# m0 b3 S. e
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
: d% S6 k4 _  E还有一个问题,就是MEF经过MMC处理之后停止分裂,会一直贴在哪里不死吗?最后MEF就怎样了? 谢谢!& N# a& E( I* n" x

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还有一个问题,就是MEF经过MMC处理之后停止分裂,会一直贴在哪里不死吗?最后MEF就怎样了? 谢谢!7 ~# F. h0 A, m* U# r; F7 w. B
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补充内容 (2012-3-5 16:18):9 C: E4 `* i$ c
还有一个问题,就是MEF经过MMC处理之后停止分裂,会一直贴在哪里不死吗?最后MEF就怎样了? 谢谢!
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( A3 N! w8 N' T  d7 L& v补充内容 (2012-3-5 16:18):% W( e/ s$ I: Z  e+ C: E+ k: K$ V
还有一个问题,就是MEF经过MMC处理之后停止分裂,会一直贴在哪里不死吗?最后MEF就怎样了? 谢谢!
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沙发
发表于 2012-3-5 16:04 |只看该作者
请问,一只孕鼠怀了多少胎鼠?看胚胎大小,如果不是因为只有3~4个胎鼠的话,感觉至少是14天以上的了...
, I) a0 w, J% \! ~% S2 r还有,LZ进行原代细胞分离都不带个手套么,也不怕污染...
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藤椅
发表于 2012-3-5 16:13 |只看该作者
回复 song58 的帖子
! O- y& K& @) B
" X6 [% x4 J0 W" p1 I嘻嘻,从来没带过手套,太贵了。我倒是害怕老鼠不干净~~
- u$ ]  `# t, w$ h( a我觉得这胚鼠是不小了,这窝就3只
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板凳
发表于 2012-3-5 16:19 |只看该作者
回复 yuhaoze 的帖子5 C8 Q( z* L. ?3 w, a* b
: z. o% k+ }- K" q7 V
你们老板连手套都要省啊...太大的胎鼠做成MEF以后感觉细胞状态不太好,长的慢
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报纸
发表于 2012-3-5 16:19 |只看该作者
晕,网不好,点了这么多次

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地板
发表于 2012-3-5 17:51 |只看该作者
第二张图,你那胚胎也太大了,呵呵,感觉再过一两天就快出生了。取13.5天的胚胎做吧(胚胎很小的!如果肉眼看起来困难,可以放体视镜下操作),把头、尾、四肢和内脏(红色的一团)去掉,消化成单细胞接种,平均1胚胎的细胞接种到2个10cm皿,细胞长的很快。13.5天的胚胎,杂细胞最少!
8 p# R. O& s% k1 K- V3 O. X' b& ?8 b3 f5 A
另外,消化的时候,别消化的太厉害把细胞消化死了,呵呵。其实,MEF很好做的。
& L4 w7 e+ E+ {1 C' ?5 b0 O* `. u3 g5 P0 V( n. W) a) F$ R5 D" D( N
戴手套吧,别污染了,就白忙活了,记得加2X双抗。* r8 B& ], r7 E# s9 K( b
& \5 j2 Q3 E9 X
MMC处理后大约三四天后会慢慢出现死细胞,一周左右大量死亡,但有些细胞能坚持到2周及以后。
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发表于 2012-3-5 18:05 |只看该作者
回复 receiver1 的帖子
9 y/ f* m9 T( b. h5 n
, s; R) v* ^, v$ w$ P% L) d谢谢! 过两天MMC来了就处理看看

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发表于 2012-3-5 19:33 |只看该作者
MEF经过MMC处理之后,没有DNA复制能力了,但是怎么会一直在那里不死呢。。。???
3 K  g/ C6 ~& |& b( W6 {- A  N( x6 Q( ~+ `1 U0 N' P
到了衰老的寿命也要死啊。。。。。。一般一个星期内用,3天左右最好。
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发表于 2012-3-5 19:46 |只看该作者
为什么这么强调带手套呢?
7 n+ x1 n' M' K3 p; `( k% q戴手套就能避免污染了?这毕竟不是主要的。
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发表于 2012-3-5 20:08 |只看该作者
回复 xiangchou812 的帖子
' Z4 r! h/ i0 L1 F  ]3 R* v3 `' M+ j6 a- `0 C* S: p2 t
:D:D:D:D
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