关于饲养层细胞制作

yuhaoze

这两天正忙活小鼠MEF细胞，在 懵懂干细胞 的大力帮助下，终于建立起4批了。但其中有2只老鼠并没有严格按照12.5-14.5天的教科书式的实验步骤，而是请养动物的师傅按照肚子大小来粗略估计的。
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有一直孕鼠肚子里的3只胚胎，都非常大了， 胳膊腿都不太好往下拽，后背的皮肤还有点儿硬邦邦的，我还看到白色的类似骨头的东西，消化完了放到培养瓶，8小时之后观察，有很多细胞死的，比发育程度小的胚胎死得多很多，但也有部分细胞贴壁了，也在生长分裂，形态与MEF很相似。
0 t' ~: O5 @, c我有一个问题，为什么必须要12.5-14.5天的，有没有相关的文献，或者前辈们有没有经验，那些用非12.5-14.5天胚鼠建立起来的饲养层细胞，对ips或ES的生长有没有不良的影响？9 I3 O- R- {2 P8 Q/ T: T1 X

' F2 o2 X3 Z& [, O8 C$ q1 C补充内容 (2012-3-5 16:18):
  i- c( U9 `1 ^. t" S9 X1 T% x! f还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
1 m* W; U; h) l& U% p0 l还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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6 R/ C, z) j! n/ x1 F9 m补充内容 (2012-3-5 16:18):( D0 _- w# U: Q& l7 a3 L
还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！0 d. b2 w& r, E$ J0 N% E4 {
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
0 O* {; d9 O- [) I还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
4 m6 H0 y; |5 {/ B还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！
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补充内容 (2012-3-5 16:18):
; E. ]( t' h4 f4 d  D, f* u+ x0 ?还有一个问题，就是MEF经过MMC处理之后停止分裂，会一直贴在哪里不死吗？最后MEF就怎样了？ 谢谢！

song58

请问，一只孕鼠怀了多少胎鼠？看胚胎大小，如果不是因为只有3～4个胎鼠的话，感觉至少是14天以上的了... " J! ?* @( m& X
还有，LZ进行原代细胞分离都不带个手套么，也不怕污染...

yuhaoze

回复 song58 的帖子+ ]- L- l3 A2 s  h* v( p9 I7 {& j
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嘻嘻，从来没带过手套，太贵了。我倒是害怕老鼠不干净~~& T% g4 t; x5 y; o
我觉得这胚鼠是不小了，这窝就3只

song58

回复 yuhaoze 的帖子) H) _) s/ N/ k1 ]- |7 a* Q+ k

" g# E6 M8 {$ y) d# j你们老板连手套都要省啊...太大的胎鼠做成MEF以后感觉细胞状态不太好，长的慢

yuhaoze

晕，网不好，点了这么多次

receiver1

第二张图，你那胚胎也太大了，呵呵，感觉再过一两天就快出生了。取13.5天的胚胎做吧（胚胎很小的！如果肉眼看起来困难，可以放体视镜下操作），把头、尾、四肢和内脏（红色的一团）去掉，消化成单细胞接种，平均1胚胎的细胞接种到2个10cm皿，细胞长的很快。13.5天的胚胎，杂细胞最少！
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4 `; B6 A- d0 U' F% y0 n, S另外，消化的时候，别消化的太厉害把细胞消化死了，呵呵。其实，MEF很好做的。4 i! l8 V0 W' }7 t

2 x2 G. U& z$ @% I戴手套吧，别污染了，就白忙活了，记得加2X双抗。
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+ j1 P4 o* @" G' dMMC处理后大约三四天后会慢慢出现死细胞，一周左右大量死亡，但有些细胞能坚持到2周及以后。

yuhaoze

回复 receiver1 的帖子
- U, s9 r5 h/ z4 k" }5 k3 b/ Q
# C) v/ S' N6 A& r4 e9 C谢谢！ 过两天MMC来了就处理看看

jessewill

MEF经过MMC处理之后，没有DNA复制能力了，但是怎么会一直在那里不死呢。。。？？？% o) `- C6 _5 ~) s+ |! G

7 S. \& A) A$ V8 {到了衰老的寿命也要死啊。。。。。。一般一个星期内用，3天左右最好。

xiangchou812

为什么这么强调带手套呢？5 p* |8 k& A5 S' X" e
戴手套就能避免污染了？这毕竟不是主要的。

yuhaoze

回复 xiangchou812 的帖子7 R: e1 s% I3 [  H9 C
) z& X$ x* h: M$ S1 ^! `- `9 c
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