有诱导过EMT的经验人士吗？能不能讨论一下，

markllq

# g  U! g, c$ ]! u( j
   一直在建EMT model，已经三四个月了，几乎没有什么进展，尝试过几种不同类型的epithelial细胞系。最开始用的是HT29细胞，通过过表达snail诱导，real-time和western检测的结果都显示snail表达量非常高，但是很奇怪，细胞一直看不出明显的形变，检测E-cadherin的mRNA水平和蛋白水平都没有差异。
' v  |, l: o+ B% }& q: o2 [. u   后来我们向weinberg实验室借了一株永生化的HMLE（immortalized human mammary
  c  y2 w8 c" n, [1 L/ depithelial cells）细胞系，这个属于正常细胞系，研究起来更容易。我们尝试用snail，twist以及tgfb三种方式诱导，从weinberg以前的paper来看，诱导一段时间后细胞会从紧密的上皮样变成松散，并且形状很长的细胞，但我们按照paper里面的方法诱导一段时间后（已经是第9天了），还是没有看到明显的形态变化。  M) R2 m- R1 c3 w
    weinberg的paper里面关于EMT诱导的细节其实写的并不是很清楚，所以我担心是不是忽视了一些很重要的细节问题。比如血清的问题，这株细胞培养时是不能加血清的，诱导EMT的过程没有血清会不会有影响？另外，感染完细胞以后能不能继续用上皮细胞的培养基培养，还是需要换成其他的培养基？+ V- g! ^8 r9 f( S( \

5 `, @0 e2 I8 k! U+ p恳请有EMT经验的同胞指点，不胜感激！
3 h" E) r6 A+ n* l

胡问成

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2 a6 E0 k+ s  R0 y6 M* Q# [! L5 R* c
不是还可以用TGF-b来诱导，同时做，EMT好像对细胞珠有要求吧

markllq

回复 胡问成 的帖子# w, ^' `& k) n0 L; c4 a2 J' k8 f
+ E, F- d$ V. c/ L( b
我们也试过tgfb，似乎细胞没有太大变化，似乎看不出明显的形态变化，你做过EMT吗？能不能交流一下？

yac508

你可以看看别人的文章，做EMT转化由很多的模型，从别人的文献中可以得到借鉴
# N8 b+ ^2 p3 \, q另外，做EMT的模型是对细胞有相应的要求，并不是所有类型的E型细胞都可以来做: x0 t# z- S: _& j
据我了解，做EMT转化，肺癌细胞株A549 是一个很好的细胞系。结肠癌HT29不知道" b5 ^3 ^& v& X0 O! y
是否可以诱导

markllq

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5 b4 W7 {- z, U# ~
  U, ~1 |0 w. }& }2 R9 P非常感谢！我们试过A549，用tgfb也诱导出来过，现在正在摸索HMLE细胞EMT的条件。希望能做出来。

windy19840

楼主，我现在也在做这方面研究，有机会多交流，我Q46942916.
( u1 H4 U* f. r, T我主要研究TGF-b对EMT的效应。; G- m6 {# _" n% Z5 r
用nmumg、MCF10A或HDCK是常用的EMT模式细胞，但这几种细胞培养起来不容易，国内货源也很少，所以做EMT也不是很容易。
9 I6 W# R. x$ J5 F3 O6 X' ^& gHacat是一种研究tgf-b效应的模式细胞，相信如果是做TGF-b诱导EMT是可以成功的。) \. a! E2 h: l  s2 k+ E
弱弱的问一句楼主，还有能否问一下你的HMLE细胞能否赠送一些？

markllq

回复 windy19840 的帖子7 \4 c' |& w$ C, m( w

' d; U1 F0 l; C' f0 L( _* s2 X你好，我的model现在已经建立好了也比较稳定，其他的细胞系也尝试过。HMLE的细胞我们这里冻了很多，但是毕竟是其他实验室赠送的，我们没有权利再次转赠。你如果真需要的话，建议跟weinberg发封邮件找他们借，weinberg人很nice，他们这株细胞已经借给了很多实验室，他应该不会拒绝。HMLE的细胞系缺陷还是很大的，首先是增殖非常缓慢，诱导一轮EMT下来需要半个月时间，其次是EMT效率不高，很多细胞都不能响应。因此可能有表型也难看出差异，用其他细胞系可能更容易做出表型。

windy19840

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2 U! y8 V4 I' c2 H& Z4 v' o3 L7 U
细胞从国外运到国内是很不方便的，我不知道你们当时weinberg是如何送给我的呢？
8 d4 D& z; A6 ?& c  z6 O  [还有，你现在主要的诱导模式是什么？是tgf-b还是细胞基质或者什么？
1 n4 [5 r3 P% w2 T" a! m6 z/ p在此请教了，期待回复，谢谢！

markllq

回复 windy19840 的帖子9 n- A0 [2 g( S! f9 [( Y6 w
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他们是直接用干冰寄过来的，一两个星期就到了。这种细胞可以用tgfb直接诱导，或者过表达snail和twist都可以。

hunter_33

1 @4 n+ R% Y3 ]0 t  y
' Y* N2 |$ \# L3 Q6 Q9 @你好，我在论坛里看见你的在用weinberg 的HMLE cell line 诱导EMT，这是一株非常神奇的细胞系，我想请问一下你们是用什么培养基培养的？我们这总是养不好，状态很差。