有诱导过EMT的经验人士吗？能不能讨论一下，

markllq

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   一直在建EMT model，已经三四个月了，几乎没有什么进展，尝试过几种不同类型的epithelial细胞系。最开始用的是HT29细胞，通过过表达snail诱导，real-time和western检测的结果都显示snail表达量非常高，但是很奇怪，细胞一直看不出明显的形变，检测E-cadherin的mRNA水平和蛋白水平都没有差异。
, Z& n( y; N7 Z- }! f& x0 K   后来我们向weinberg实验室借了一株永生化的HMLE（immortalized human mammary
: K* t! G6 v# x' v9 b. Iepithelial cells）细胞系，这个属于正常细胞系，研究起来更容易。我们尝试用snail，twist以及tgfb三种方式诱导，从weinberg以前的paper来看，诱导一段时间后细胞会从紧密的上皮样变成松散，并且形状很长的细胞，但我们按照paper里面的方法诱导一段时间后（已经是第9天了），还是没有看到明显的形态变化。- A  M8 u5 w5 T3 D# c# y
    weinberg的paper里面关于EMT诱导的细节其实写的并不是很清楚，所以我担心是不是忽视了一些很重要的细节问题。比如血清的问题，这株细胞培养时是不能加血清的，诱导EMT的过程没有血清会不会有影响？另外，感染完细胞以后能不能继续用上皮细胞的培养基培养，还是需要换成其他的培养基？, J* H8 |7 D. ?2 k* M
3 ?) v/ n0 N6 _+ }0 G, a. ^
恳请有EMT经验的同胞指点，不胜感激！
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胡问成

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1 E- p2 s: a7 N, e# M
8 s! ]0 U, d1 N- U% `6 c不是还可以用TGF-b来诱导，同时做，EMT好像对细胞珠有要求吧

markllq

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: {9 L1 d5 T- G* F7 u! ^" \/ R, ^0 T& F! ?
我们也试过tgfb，似乎细胞没有太大变化，似乎看不出明显的形态变化，你做过EMT吗？能不能交流一下？

yac508

你可以看看别人的文章，做EMT转化由很多的模型，从别人的文献中可以得到借鉴# j; T, J" ~; g+ e- }
另外，做EMT的模型是对细胞有相应的要求，并不是所有类型的E型细胞都可以来做
/ G! P7 M5 E- a) ~据我了解，做EMT转化，肺癌细胞株A549 是一个很好的细胞系。结肠癌HT29不知道
* T6 Z6 E+ y9 J! G/ G/ y是否可以诱导

markllq

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- W9 W* Y- \4 G1 j! S" W, a7 k6 C. m' {, h: t  J. _
非常感谢！我们试过A549，用tgfb也诱导出来过，现在正在摸索HMLE细胞EMT的条件。希望能做出来。

windy19840

楼主，我现在也在做这方面研究，有机会多交流，我Q46942916.
4 i- b# F( Q3 V我主要研究TGF-b对EMT的效应。' ^+ y3 C3 E; d) D
用nmumg、MCF10A或HDCK是常用的EMT模式细胞，但这几种细胞培养起来不容易，国内货源也很少，所以做EMT也不是很容易。
" Y" S- S( E- k3 zHacat是一种研究tgf-b效应的模式细胞，相信如果是做TGF-b诱导EMT是可以成功的。1 `0 G/ F3 ^/ m7 {/ g7 G" `
弱弱的问一句楼主，还有能否问一下你的HMLE细胞能否赠送一些？

markllq

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; @) N. i. Y1 J: s2 y' x; |- n2 B* r- p  g2 h' d
你好，我的model现在已经建立好了也比较稳定，其他的细胞系也尝试过。HMLE的细胞我们这里冻了很多，但是毕竟是其他实验室赠送的，我们没有权利再次转赠。你如果真需要的话，建议跟weinberg发封邮件找他们借，weinberg人很nice，他们这株细胞已经借给了很多实验室，他应该不会拒绝。HMLE的细胞系缺陷还是很大的，首先是增殖非常缓慢，诱导一轮EMT下来需要半个月时间，其次是EMT效率不高，很多细胞都不能响应。因此可能有表型也难看出差异，用其他细胞系可能更容易做出表型。

windy19840

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2 s  Z/ i+ n1 B7 A# M5 a* u+ ^. s5 w7 G2 q
细胞从国外运到国内是很不方便的，我不知道你们当时weinberg是如何送给我的呢？$ \' y- E& Z* o6 \
还有，你现在主要的诱导模式是什么？是tgf-b还是细胞基质或者什么？
. `% \$ [9 R( P8 W: z' b在此请教了，期待回复，谢谢！

markllq

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3 y2 E* K2 y2 q2 F- K
+ Z0 }" `3 I$ a; d他们是直接用干冰寄过来的，一两个星期就到了。这种细胞可以用tgfb直接诱导，或者过表达snail和twist都可以。

hunter_33

1 m. a5 k4 ~8 l% j3 D4 o* f2 m1 [" E8 G2 i
你好，我在论坛里看见你的在用weinberg 的HMLE cell line 诱导EMT，这是一株非常神奇的细胞系，我想请问一下你们是用什么培养基培养的？我们这总是养不好，状态很差。