慢病毒感染细胞

huangcong1988

诱导iPS，病毒滴度测定后，要感染供体细胞了，但是不知道病毒颗粒与细胞数目的比例，文章中都没有提到说病毒颗粒与供体细胞比例，但是个人觉得病毒数目跟供体细胞数应该是一点比例的，不然就没有必要测定病毒滴度了，也没必要浓缩慢病毒了，所以想知道大家一般感染细胞的时候病毒与细胞数目比例是怎样的？怎么确定呢？

rexhz

可以先测定最佳感染复数MOI

huangcong1988

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谢谢，我是做iPS，现在滴度已经测定了，准备感染细胞，但是现在不知道病毒用量，就是说不知道病毒颗粒数目跟供体细胞数目的比例，所以想知道大家在感染时是怎样确定病毒与细胞比例的

rexhz

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' i' m) Q( s( t7 @4 [  |! e4 q* `- n$ o& `& R5 X
MOI就是测用多少病毒来感染细胞。一般用空载来做。你要做加入病毒量的梯度10ul,50ul,100ul,,，统一感染已知数量的细胞（比如一个dish中长满你的细胞大概是多少的细胞数目）然后估算细胞被感染上的比例，当病毒量增高，而被感染率没有明显增高时，那个梯度就是最佳的病毒用量。一般都是80%的细胞被感染上的病毒的用量。这样以后就能根据不同的病毒的滴度来统一病毒用量。

huangcong1988

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$ B- @% w! f8 t4 x0 k- A/ ^6 W
% S4 r1 x- y' N我的质粒不带荧光，所以我测定病毒滴度的时候只能用定量，所以就没有测MOI，还有MOI是什么指数？我直接测定的是病毒颗粒数（当然也包括不具备感染能力的病毒）。由于我的质粒不带荧光，所以没法肉眼看感染效率，请问，这样该怎么办呢？怎么摸条件？你们一般感染的时候病毒用量是多少呢？跟细胞是几比几？

不倒翁

我们一般不测 只看GFP得亮度来估计病毒的滴度是否够用 各个病毒的比例更重要

huangcong1988

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# @- f; {) j' V( o( r& C我这个载体不带荧光啊，所以没法目测感染效率，所以只能用定量测滴度，然后再摸条件，摸病毒与细胞比例，不过我觉得这个麻烦，所以想问一下大家，一般是什么比例？个人觉得应该是病毒比细胞多吧？还有，各个病毒比例不是1:1么？你是说包装病毒还是用病毒感染供体细胞？

rexhz

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+ _& r3 j8 @/ c9 u8 `1 s4 w" B2 ~, n% D% L) l4 Y, m$ u
没有GFP的话很不好估计，还有一种办法就是要去找IPS做你这种细胞的文献，一般文章都会说10mm dish 里面加入病毒多少ul 病毒滴度为多少。这样你就可以根据你的病毒滴度来换算。我是做病毒感染鼠间充质细胞，MOI为1，就是一个病毒感染一个细胞。
6 }9 u5 ^+ W0 s0 q6 L, f
, f7 L- o' L) ^Multiplicity of Infection (MOI) is the number of transducing lentiviral particles per cell.  
/ P, z+ P9 U- p0 i" \( Y$ w( A9 OIt is highly recommended that for each new cell type to be transduced, a range of MOI : j8 r: C& }: ]3 s6 x7 o- _# D
be tested.   * O6 u8 @( r. h. F4 W4 ^

9 g3 n" m0 B: K- ~1 K: C+ w+ nTo calculate:  (total number of cells per well) x (desired MOI) = total transducing units ! l4 I7 h! u9 T, y+ w
needed (TU) # k' _4 ?3 t0 Y
7 U3 p" d5 ^" v# H  S5 E
(total TU needed) / (TU/ml reported on C of A) = total ml of lentiviral particles to add to
5 D# W! |6 M: u0 w7 i/ C0 veach well

daviddow

MOI=10

yuheng

我做慢病毒感染UC-MSC，MOI在1~16 时有很好的剂量依赖，16以上就不明显了，所以一般选择1个细胞加16个病毒。