NK细胞越来越少

kedele

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大家好！我做的是NK细胞。用NK细胞分离液试剂盒从脐血中分离出来。然后做流式检测CD3-CD56+的含量。分离的最好的只有30%左右。用脐血直接检测出来的CD3-CD56+是10%左右。然后用的培养基是VIVO-15+IL2(100万单位/L)+IL12(5μg/L)+双抗（1%，2万单位），接种密度是1×10^6/ml。用T25瓶培养。第二天吸出悬浮细胞，弃贴壁细胞。细胞密度无明显下降。培养5天后，细胞数量明显下降，流式检测CD3-CD56+含量也降低。希望大家能帮忙提出一些建议和意见。谢谢大家！以下是我的实验数据和相关图片：

笨笨的图图

看你的图，发现以下几点：背景很高，死细胞很多。建议使用三标抗体：CD3/CD16+56/CD45，用CD45圈门,结果会更好看滴~~

kedele

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" y% h; u# {, H3 y5 ^" f. P( g谢谢了！我们的流式都是有专人做的，我参与不进去。请问背景很高是什么意思？我想要解决的是死细胞太多的问题。谢谢！

笨笨的图图

死细胞多是你培养的问题，现有条件的改进上就是加一个CD45,据我所知，NK的培养很难，尤其是培养基的选择，你再看看吧~

kedele

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好，谢谢了！- t: E5 Z4 T, h5 O5 a$ L

zuming

无血清培养确实不好养，如果没有特别的要求，还是用加血清的培养体系吧，会容易一些。

kedele

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我们本来做了三个对照，其中加10%的1640培养基效果没有这个好，所以就用这个了

jack063@163.com

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( D0 {. g3 t. J/ ?9 A) Y你好，我目前也是培养NK细胞的，仔细看你的图片后有几点小的建议，大家互相学习：1 M' j/ M, b9 U, e+ Q
1.“第二天吸出悬浮细胞，弃贴壁细胞。”楼主是都考虑下这个天数上的操作是否太绝对了，我们目前要看细胞的数量、形态、培养基颜色判定是否进行这部操作，细胞就像一个个的“宠物”不是生产流水线步步严格SOP操作。
2 n+ X  \2 P2 }- M1 A% {9 O1 p2.不加血清的培养基，生长的时间长是很难的，楼主可以考虑适当补加血清试试，我们加了血清的可以培养到10-14天。

kedele

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好的，谢谢了！

LL87

弱阳性