错在哪一步，望赐教！------谈脐血分离MSC

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具体步骤是：脐血稀释---红细胞裂解液裂解稀释后的脐血---取上清液-----再用密度梯度离心----吸取白膜层（白膜层不是很明显）---PBS洗两便---一部分养在DMEM中想得到MSC，另一部分养在EGM中为了得到EPC（用的是培养瓶，没有铺胶）------可三天后换液（换液时没有发现贴壁的细胞）------换液2天后发现瓶中仍没有贴壁的细胞。结果什么也没培养出来，步骤中哪一步错了，望赐教！

丁丁儿

那请问你见到细胞了吗？就算没有贴壁的，在显微镜下观察应该也能看见细胞啊 ，再说了，红细胞裂解液本身就对细胞有影响，很可能导致细胞死亡，试着变化一下红细胞裂解液

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' _9 V' ?' U" A1 |6 H, N* T
你指的是取原代时不铺层吗？

Demon_CN

试验前准备。
/ Y% G' H2 @2 W+ u0 q个人觉得你要准备经过TC处理过的培养瓶
9 h3 e) `1 z0 W" D培养基，L-DMEM+10%FBS（血清里还有丰富的营养，还有促进细胞贴壁的因子这个是以前学长告诉我的，不要问我具体有什么因子）
2 n3 }! C& R1 n- N开始做试验
  ]% `, h* \3 f+ J. Q按照你的操作，我觉得问题不太大
! g% ^! \0 Q; t8 ^3 B, u# W具体你的接种密度多少，我接种纯的MSC是1*10^4个/m2 ,不知道那个里面msc的含量，感觉这密度长的最好8 Z0 j1 ?3 W9 w' c* `
一般第一次贴壁要长点时间到概4-5天，第二次传代2小时就贴壁了

henryjia

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建议铺层，但是我确实实验过不铺层，也一样能长。

542177563

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养EPC是不是一定要铺层？我一般用的是培养瓶，听说瓶底一般有铺层，有时最多用多聚赖氨酸铺一下罢了！这对培养出EPC细胞的影响大吗？

Roden

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# y1 r4 Y. i0 ?* m5 s8 x, h* ]2 K! F" t, W0 _
脐血间充质的成功率大概在20%~30%，楼主可以一气儿多养几个。0 C: f4 g+ d1 k- u: D/ E2 F+ [
贴壁细胞呈集落的速度与细胞自身和培养环境都有关系，不知今天爬出来否？

henryjia

首先，RBC裂解没有必要；直接梯度离心以缩短离体时间；再者，长出细胞克隆一般要8-10天，耐心，淡定。
, K* }. f# J4 C' P& r, i1 K. z' {( ]0 [& \
如果用EGM2培养液提取EPC是一定可以的，脐血EPC比MSC多多了。千万要注意一个问题就是不要因为担心其他细胞污染，就过于频繁换培养液。
7 G' X. Y8 \6 A: Q2 r$ s- Q6 F( V# g  u  }  k/ s, b; p1 n+ d
祝好运。

wind789

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7 w9 n0 C# I# F8 C& l  M0 Q- A, h7 p我们也正在摸索脐血MSC，推荐一篇文章给你。共同加油！

evial

裂解了就不要去分层，不会有分层，上清都是不要的东西，沉淀下来的才是你要的东西，你把孩子当垃圾倒了，当然后来就没有孩子养的出来了