我最近一直在诱导分化MSCs，诱导成骨分化成功，可是为何我诱导成脂细胞不成功呢

634996425

0 _( L  L) u) V/ F6 S6 M! w, P
# O  l- B7 y/ V+ j8 t8 c! s大家好！我最近一直在诱导分化MSCs，诱导成骨分化成功，可是为何我诱导成脂细胞不成功呢，我的诱导方案如下：
* F9 V5 M4 x% N5 a! ]      1μM地塞米松+10μM胰岛素+0.5mM IBMX+100μM吲哚+10%FBS+L-DMEM。请问大家，传统用诱导培养基和维持培养基以2+2形式更换，但是我查过很多中文文献，英文文献只是说用诱导培养基每周更换2次培养基，请问，到底是哪种，还有我用油红染色，以裴雪涛出版的干细胞实验指南的操作进行，结果一次都没染出来，请问甲醇可以固定脂肪细胞吗？谢谢大家帮忙解决这个难题吧

tjbone

不能用甲醇固定，因为甲醇为脂溶剂，小脂肪滴都被溶解了！！
# Q* c( V0 p$ N/ H% P6 c可以用4%多聚甲醛水溶液固定既可！！！！！
5 ~+ \1 w' m2 M5 [; E2 ^8 D染色之后不能脱水，甘油明胶封片！！

634996425

请问用4%多聚甲醛固定，为何细胞都脱掉了呀

细胞海洋

回复 634996425 的帖子1 @2 z% _; _/ }1 Q0 U' G- |

( [6 q. h; _3 U) L你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
5 U. d( L, v; N4 A3 t" i8 {
- z) T9 F/ [( R否则他会看不到

634996425

回复 细胞海洋 的帖子8 u* y! I6 g" [& R2 ~
, Y3 s) J. v4 S- |1 j6 ~8 Z
谢谢您了，版主您好！帮忙分析一下吧，为何我在诱导成脂细胞过程中，还没到2w就有那么多脂肪滴一样的上浮，并且用油红O染色，可是结果经常出现一大片黑色的，我都不知道那些是什么，因为过去实验室没做过这方面，我是各路求人。我的成脂诱导培养基是低糖DMEM+10%FBS+0.5mM IBMX+1μM地米+10μg/ml胰岛素。我用其进行诱导21天，可是细胞变少了，并且脂滴没有了，一染色一大片黑，我用油红O 0.5%，染色10-15min;目前我查文献看很多人用3+3;2+2；我尝试用诱导和维持培养基做，可是每次换成维持培养基结果第二天很多似脂滴一样的飘起，我用油红O染色结果飘起的出现很多脂滴染色，真让我郁闷，不成功我誓不罢休，可是我需要大家伙帮忙，谢谢了

细胞海洋

$ q3 X/ o3 q* n: x) g- U' @2 i, S  K# V0 p# @/ G: P
回复 634996425 的帖子9 S" B7 _3 b9 p+ I4 J

, d7 g' X1 b' v! }6 [建议你发新帖提问/ g" p/ E* Y" k

3 Z9 A+ j! v( `+ R! }! b( C4 J! J& Y很抱歉 我只是管理员 专业知识很菜的 所以等大家的帮助吧 抱歉了

634996425

回复 细胞海洋 的帖子
6 |0 F( v2 T# E$ k$ E1 U$ S+ s" h/ r, |3 P- [5 [/ W  R
对了，请问国内有哪些著名的干细胞类公司，我想毕业后到他们那里工作，可以帮忙介绍一下吗

细胞海洋

回复 634996425 的帖子- u! |( k0 T5 z% _1 C7 s
3 w6 n$ E# ]& F" q
http://rencai.stemcell8.com/index.php6 V. n" o) G* v1 Y. V

% O% @  i2 I& S先在人才库登记吧

luckywen

会不会配制诱导剂时溶剂出现问题了，不同诱导物质要求溶于不同溶剂中，最后还需要调ph值。

634996425

我在配制诱导剂时，脂溶的我用DMSO,水溶的用超纯水。应该每问题。胰岛素我用水溶解的