关于mES N2B27 feeder-free serum-free培养

vegetax4132

2 E# ^! W$ Z% o+ |) f# z' P9 ~8 Q
3 g) \4 ^4 u8 h. j+ d, x! Z; A最近想建立mES的 feeder-free serum-free的培养体系: B& N4 b! ^" Y; N. N- w- l
结果发现细胞传入N2B27培养基中大量不贴壁。但克隆球都是活的，再移到feeder上也都能长起来。
6 c, E% m4 g5 s7 u9 d大家有遇到过这种问题吗？0 e/ c! W& D, V4 {
. |# I# V' ]. U+ |
我用的培养基:6 A; R7 |! O" a( j  ^8 ~) e* z# o; O
N2B27+LIF+2I+β-巯基乙醇+Glutamax+双抗      & g6 o; u3 T5 o" b' b
看YING QL 06年的那篇protocol中没加非必须氨基酸和丙酮酸钠，我也就没加。+ D- C5 E1 P; S# N7 u

5 W5 {, u2 [# P" o9 F( \" [在N2B27中， 图中圆圆的小球基本都没贴壁：8 M2 a0 T9 m: W2 Y3 b

2012-8-8 21:45 上传

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* n+ K: F3 B1 m; }1 R% [将图中小球移入feeder  血清中，就都贴壁了：5 c9 P# D6 @' J" T% m/ |

2012-8-8 21:41 上传

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zmm

回复 vegetax4132 的帖子1 \$ l! Y& D1 r- S% O( A& z( R9 W
4 |) \7 i& s6 S2 s; o0 h! B9 n3 z
你需铺些基质，克隆就会贴壁了。

vegetax4132

回复 zmm 的帖子# W, p# W) D/ l- h0 g/ C

8 z& T, A6 _+ N! e7 W7 E基质？  是什么啊？   

frankieisme

回复 vegetax4132 的帖子- t* M4 Y/ }0 d. D

. o7 L" z0 _: N' b3 |0 v有一种"matrigel"

vegetax4132

回复 frankieisme 的帖子) s/ S9 H7 A- {# [$ v/ j

- |; w# T  e1 {4 F* ?哦      是一种比明胶更好的胶吧？   听说过   4℃铺  37℃会凝固   是这种吗？

zpzp0312

5 y: N, X- u$ E' X) K9 g8 p
/ Z- Z6 i0 `" M. k  J( I其实你这种转移到饲养层上的细胞球也已经有分化倾向了5 F/ O& }$ [. l4 J' l0 E
另外，matrigel我们使用过，只能说效果不明显
. d3 ~5 u7 j3 H( @4 R8 k当时我们使用的是ESGRO feederfree medium
$ N2 {4 R7 U  R& ]5 G, b' ?效果和楼主的这两张图相似6 N7 m7 y7 n, C9 g# b. ^
在matrigel上面也不能很好贴壁，有大量的细胞球似乎和基质有些黏连，但适当晃动就会飘起来4 c. ^' p  F4 I3 ~4 o/ u
转移到饲养层，就可以发生贴壁，但是也有分化倾向
+ l  d9 s9 Q6 y1 k7 X但如果直接使用饲养层培养添加这个培养基，细胞生长状态还是不错的1 H6 Y  \; I: L( h- ]/ b
feederfree效果不满意

zmm

回复 vegetax4132 的帖子( v# N: I+ H3 {' [- Q

( o1 S) l# o+ I' _+ n0 C4 {3 ~; E明胶等都可以

vegetax4132

回复 zmm 的帖子* [4 k2 K" P) h1 E* [( H

4 b0 {0 t# B6 [$ L; Q0 Z! A' z我是铺了明胶的，
0 e' b" j. A6 f( C# z5 s/ g) |( Z最近听说再铺一层血清就能贴壁了，试了下真的基本都贴了，不过这样克隆长的很慢了。好几天天都不见长大。。。

vegetax4132

回复 zpzp0312 的帖子
, f+ H' B" r7 c2 Q6 L* V/ q# d9 b$ D% Z1 J7 P; c, l7 F; ?4 n" d
谢谢，    不过ESGRO也是一种类似N2B27的培养基吗？      
: O3 v, t+ T+ e1 {我用N2B27+LIF 加上feeder，  发现克隆形态不好，feeder有大量死亡   

zmm

回复 vegetax4132 的帖子% Q- M* {, ~( ?' ^2 f+ b4 s
1 p9 B% O/ I  a
血清也可以。因为不含血清，所以克隆增殖较慢