问题请教我做的是小鼠胚胎干细胞的免疫荧光，想看加药后是否还能表达OCT-4

李夏

6 {5 J# J6 _/ `, v: z% B' b
9 {! E/ [! X! n4 a% g9 |. _8 @6 M我做的是小鼠胚胎干细胞的免疫荧光，想看加药后是否还能表达OCT-4，SSEA即是否还有自我更新能力，但是效果一直不好，主要问题细胞经过多次冲洗到最后观察时已经掉下来了，由于我的药物是DMSO配置的不能紫外消毒，所以有时经过四天孵育后，细胞就染菌了。。。。有没有人能指点一下啊    感激不尽啊

李夏

回复 chenks 的帖子
( @/ ?7 H& Z4 M
' ]- Z6 D$ X( {5 [; e想请教您大玻片是可以直接买到的吗，就是做免疫荧光专用的吗？是不是这样就可以不用铺明胶了啊？我之前都是先铺明胶再铺细胞的，期待您的答复，万分感谢！

chenks

回复 李夏 的帖子
' p  v+ c. M4 {, _4 S6 V, K2 R9 v( ~- w8 |
无Feeder的话,我就用六孔板,铺大玻片,但对应的抗体用得就比较多

李夏

回复 白巧克力 的帖子2 W2 C  a4 e- ^, ?0 o
" _* H% H3 F* I
请问CCM具体是什么呢？我没有用过，想请教一下。  O6 u5 w9 [1 S
其实我的应用条件不是很稳定，经常重新复苏细胞，但是由于筛药没有办法只能用无feeder培养。这里我很想知道您是用什么条件来培养细胞进行筛药的呢？期待您的答复

李夏

回复 白巧克力 的帖子& Z2 x1 Y( ?% c# Z, Y' e
0 r' o4 B: L/ x& _
CCM是什么啊，我没有用过，能传授一下吗？其实我的条件不是很稳定，但没有办法，只能无feeder养来筛药。请问您是什么条件的培养基来筛药的呢？期待您的答复

白巧克力

回复 李夏 的帖子
* f* [- s" r& g+ ]2 K/ F
, P: |5 t- f5 ^1 h1 V- k7 Q我也是筛药的，不知道我们是不是很近...你一直用无feeder的，应该条件比较稳定了，其实可以考虑用CCM促进贴壁，只是要设个空白。

李夏

回复 chenks 的帖子" l2 s2 k4 V- o2 E7 y  N5 u& M( J) [; h. t

# m# |, F) a5 m非常感谢您的答复，我用的是无血清无feeder培养法，培养基为N2B27+LIF+MBP4，因为我养的细胞主要用来筛药，所以不能用血清和feeder，否则就说不清是我的药物的作用还是feeder成分的作用，所以细胞就不是很容易贴壁，而且传代两次细胞状态明显不行了，所以很是苦恼啊

chenks

回复 李夏 的帖子
  A* V6 V  W3 [$ v, _3 b3 U7 H, y4 }3 q1 u& h! F( ~
固定时间可以延长一些到半小时.另外用24孔板后者48孔板,放入玻片也很省抗体的模拟可以试试.
& D0 b) F% Q' `5 c5 N还有一个问题你的细胞有无Feeder;如果有Feeder的话,基本上细胞是不会掉的;如果无Feeder,就会掉很多细胞.

fish_zbw1985

回复 李夏 的帖子
* L6 Y! h/ G# |7 g) R9 ]1 Y0 S
+ K/ @% N) O4 L% ~! S9 M4 E固定时间不够 用96孔板确实不好操作  特别是ES细胞都是成克隆样的  个人觉得至少需要用48孔板

jhu132llh

回复 李夏 的帖子: g4 @8 d% |1 Q

: V  Q: N5 W7 A' R; R方法看起来是没问题的% u8 T5 n7 c3 y
可是你说的省抗体我倒是没看出来- e1 _8 ]5 [$ B" S
我们做的细胞的爬片然后在做染色的时候只需要几滴抗体就可以了