怎么将出生后0-3天雌性小鼠的生殖细胞和颗粒细胞分开？

chenchunlei

贴壁？最好能有实验操作步骤

aulenuyah

你这是要分离卵母细胞吗？老鼠太小了呀

chenchunlei

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( H4 c) i: c& s
& o" v9 }1 @3 Y要颗粒细胞

aulenuyah

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' i9 ]" X6 E9 W* V6 y* b什么样的颗粒细胞？就是腔前卵泡上面的颗粒细胞吗

chenchunlei

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' P) s2 R8 E$ y, A
就是将0-3d卵巢消化后怎样获得颗粒细胞% G. ?! v  l0 N5 |4 V

aulenuyah

回复 chenchunlei 的帖子7 i( z2 n; M9 z4 P  U

, u( ~! p) r& A1 `* n我以前取过成年小鼠的。建议你不要直接消化。先在显微镜下将卵巢用异物针撕碎，然后用0.1%胶原酶吹打消化，之后再显微镜下将腔前卵泡检出，然后单独消化腔前卵泡，这样得到的颗粒细胞会比较纯净。因为你要做的是幼鼠，尚无有腔卵泡的发育，只能取腔前卵泡，而且不管怎么样，细胞都不会很多，如果细胞需要量大的话，就只能多杀老鼠了。。。

chenchunlei

回复 aulenuyah 的帖子5 i6 r3 H; p2 q' O$ w- _
* t7 U$ p3 N/ F& x3 b
谢谢
% _+ \, X0 r5 U之前用了四个卵巢一消化离心后几乎没有颗粒细胞了

aulenuyah

回复 chenchunlei 的帖子. ^2 |$ `/ m3 Q9 I3 I

9 R" r6 A2 D) g; |$ C如果这样的话，试试看不离心

chenchunlei

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那岂不会有TE在培养液里
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aulenuyah

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5 Q) ~/ M, z' z9 c8 y" D怪不得你弄不出来呢，一般消化颗粒细胞需要用透明质酸酶消化的，如果没有透明质酸酶也可以用胶原酶（0.1%浓度）代替。胰酶的作用太强烈了，颗粒细胞很脆弱，而且还那么少，受不了胰酶的。