成软骨诱导阿利新蓝染色

huajie881026

8 h. @1 w3 h$ k) j
- Q' _( `3 {* \5 }' E+ i, m! ~前些日子自己试着做了成软骨诱导分化，5天左右细胞成一团，随着时间慢慢变大，诱导至满28天，细胞团直径约达2mm，团块较白，感觉上是诱导成功了。昨天石蜡包埋，然后切片、脱蜡、脱水后，阿利新蓝染色30min后，拍了照片（如下图），一些疑惑请教做过成软骨诱导的大侠：
6 O: a$ b' ]) u1、切片是不是厚了？昨天切的时候设置的是5um，但切下来的时候感觉厚了，有些地方有重叠；
9 L# d+ Q) M4 u- |/ o+ i; F2、阿利新蓝染的是粘多糖，应该是在外周部分还是中间部分？
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5 w# `' `) m5 ^; I$ s! C200×
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tjbone

阿利新蓝染可以染软骨基质，但不知你用的是标准阿利新蓝染PH2.5还是PH4.5，PH值不同染的酸性物质不同。
- S$ J/ z2 w$ Q" R# l( p软骨含有硫酸软骨素，同时在软骨基质中含有氨基聚糖，也可以用翻红O或甲苯氨蓝染色。

huajie881026

回复 tjbone 的帖子  F1 h6 ]/ \& T# h* z. C+ ~

* @0 s; r/ S# _7 h# w" r- T请教包埋前细胞团需要脱水吗？感觉没有脱水的的话，石蜡没有将细胞团很好包住导致切片不好切。

tjbone

: r' p! e" N: v: O* Q9 K. w
+ }5 I3 t5 {) z' ?) }$ A2 y& g8 z9 o
一定要按要求先固定，再由低浓度酒精开始到高浓度脱水，二甲苯透明、浸蜡、包埋才行！！！

huajie881026

回复 tjbone 的帖子5 F, u( S+ c+ ^& s- }
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嗯  受教了。。。非常感谢！

tutufei

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" ~  K) c- Y+ f9 q3 Y. a) E: |
6 v3 A: n/ j) `! J3 q( J9 v# D请问你诱导的软骨团长得快吗，这么小的软骨怎么做石蜡切片啊？我诱导的不怎么长啊，形成的圆球，直径才1mm多

huajie881026

回复 tutufei 的帖子
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' G* v6 d6 \5 c可能细胞状态不好导致团块长得慢
3 A4 }4 b3 X% a) g' }$ T  C石蜡切片我也做的不是很好，可以试试冰冻切片

tutufei

楼主，你这个图是染完色直接拍的是吗？还没脱水透明封片吧？有用甲苯胺蓝染过吗？

644414915

细胞爬片用的是什么包被的玻片 是赖氨酸吗还是明胶啊？

细胞海洋

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否则他会看不到
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