DC细胞的培养方案和流式检测？

yubin083

semi-mature及mature DC是不容易贴壁的，如果换液将损失细胞。你可以将换下的液体离心，取沉淀resuspended，再进行检测，你会发现里面绝大多数是DC

hwlightning

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) q+ T( X. I- d6 B: x$ w0 g% r
. {$ V& g. R  y  U! P) L- v1 v/ B是不是成熟的DC细胞是悬浮的细胞，  c, V. Z2 ~$ l
我最近看我养的DC有很多悬浮的，和贴壁的，如果我半量换液的话会不会损失掉很多细胞？: Q& V3 x; Y. p! j4 `4 d1 T

yubin083

诚然，从人体血液中培养获取获取DC亦然成为不少researcher的研究方法，我仅仅想了解依靠这种方法获得的DC的纯度到底有多少（排除淋巴细胞后），其表面CD表达的情况？

yubin083

关于血液中单核细胞的分化为Mφ和DC
$ {) E$ Q- G3 |5 X+ F这种关于这种DC（表面CD1+，CD11b+，CD14+/-）国际上是有争议的，至少已故ralph steinman教授就不认可

yubin083

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% ^: k2 j- E; b% w样子有树突，不一定是DC，有一部分可能是巨噬细胞，这种细胞有小突起，而且贴壁，比DC还牢靠

透明之蓝

3、在37℃，5％CO 2的潮湿培养箱中孵育2〜3小时
2 J2 x4 [. r2 y 4、弃掉含非贴壁细胞的培养基6 k1 N' p& L- [- I

6 t9 B. Q! m1 S1 a9 t+ _% l弃掉培养基要注意，格外小心，轻轻操作！！要不细胞会损失很多！！4 y7 [; |# f. |% O/ S
关于其它问题，同问！！

hwlightning

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5 s* \3 [+ l! P# t
! V3 l" g! v3 N9 I3 E6 i/ k5 W我今天看细胞的时候发现有很多贴壁的细胞，但是贴壁的细胞也有很多树突状。

yubin083

想问下这样培养出来的细胞中有macrophage吗？如果有，大概有多少比例？

flowguo

        以前养过，看步骤应该差不多，细胞因子浓度具体记不清了，不过很多文献上都有诱导方案，一般没有什么问题。我觉得单核诱导DC经常会混有很多淋巴细胞，贴壁后最好洗干净一点。1 q0 Y0 S  W; p, M/ K
     以前都是200ml的血，诱导一个星期不出问题的话1X10^7没问题，纯度能有80-90%，多多少少还是会有淋巴细胞。不过时好时坏，有时候也很差，都不知道什么原因。
6 W3 u+ ~# O  X3 h' J( q     表型鉴定我觉得你不一定每次都做吧，养多了有感觉的，树突的形态很典型，真要要求高的可以挑选着做，流式多标的话也要不了多少细胞。0 j: |6 ?3 q/ ?( X) w
      临床试验不是很了解，同问。

flowguo

        以前养过，看步骤应该差不多，细胞因子浓度具体记不清了，不过很多文献上都有诱导方案，一般没有什么问题。我觉得单核诱导DC经常会混有很多淋巴细胞，贴壁后最好洗干净一点。
6 P, N! _5 C0 f- b4 B( W- y5 N     以前都是200ml的血，诱导一个星期不出问题的话1X10^7没问题，纯度能有80-90%，多多少少还是会有淋巴细胞。不过时好时坏，有时候也很差，都不知道什么原因。& z  l# g$ |4 ~# t% h
     表型鉴定我觉得你不一定每次都做吧，养多了有感觉的，树突的形态很典型，真要要求高的可以挑选着做，流式多标的话也要不了多少细胞。
) i7 f4 i3 z9 M, o8 {8 J      临床试验不是很了解，同问。