请教，为什么我用碱裂解法大提的质粒电泳只有两条带？

yuhaoze

今天用碱裂解法大提的质粒，跑电泳出来了两条带，想问一下，正常情况下不是三条带吗？
# \. M+ N' h5 {2 \: k1 @1 k在就是A260/A280=2.3,会影响转染效率吗？

碧落

据说，比较好的情况是三条带，一般两条带也就是可以的了。

xulijunji

我做的时候两条或者三天都表明比较纯的，至于转染。。。没做过，不过我当时做转化没问题的

yuhaoze

回复 xulijunji 的帖子9 y& @/ N* \2 }1 _/ z# ^

2 f* _. x  C  V1 ^" l0 F' c- t做转化对质粒的要求可能比转染要低一些...

weiyepan

做得最好的是一条带——都是超螺旋。。。你跑的这带型有点奇怪，建议做个酶切看看。

sanna1

没切的质粒跑出来的电泳图不是一条带吗？为什么会有两条，三条的问题?) n! ?! k- Y, r3 U2 w, |# R1 v
能解释一下吗？

rexhz

做转染最好用试剂盒提，而且是去内毒素的那种。手提里面有很多RNA

86964109

回复 sanna1 的帖子0 Z1 c4 G1 z: L( }2 \: i/ Y+ n4 W

8 @( R; i; H8 N- z0 ^4 b: x因为有超螺旋，线性、和缺刻3种质粒形式，他们的电泳速度不一样，线性跑得最慢好像，* R. `! W# G8 L: f
所以...
6 L* A' x4 b6 \" X- L
1 x1 y: {* O- j( m& L补充内容 (2012-10-25 08:09):$ o' w) P) @  G" s& G- o7 X! p
如果是瞬转,建议环形质粒转染,因为环形质粒更容易进入细胞,这样可以提高转染后阳性率.
1 H. U2 h  ~# m: S有人说的：如果是挑稳转,建议线性化以后转,因为稳转不要求转染效率,线性化的质粒更容易整合到细胞的基因组中,这样可以提高克隆

zxcv12345

回复 yuhaoze 的帖子: w$ B1 R1 ?" h) n+ F: i; k

; n& B$ f" O- ~1 n; H7 H2 e转染纯度要求高，最好要用试剂盒提取质粒$ w$ G+ u8 Q# q! g+ U5 m; a+ H1 v: `
提取后的最好为超螺旋，也就是一条带

yuhaoze

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1 k0 D* G# i6 k; C( M, Z. K2 [7 M) r- u
碱裂解法提不出线性的DNA