请教，为什么我用碱裂解法大提的质粒电泳只有两条带？

yuhaoze

今天用碱裂解法大提的质粒，跑电泳出来了两条带，想问一下，正常情况下不是三条带吗？0 e  b7 a+ h7 s8 Z
在就是A260/A280=2.3,会影响转染效率吗？

碧落

据说，比较好的情况是三条带，一般两条带也就是可以的了。

xulijunji

我做的时候两条或者三天都表明比较纯的，至于转染。。。没做过，不过我当时做转化没问题的

yuhaoze

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9 L2 [: k; ?+ i$ y
6 \3 k9 X+ c( J做转化对质粒的要求可能比转染要低一些...

weiyepan

做得最好的是一条带——都是超螺旋。。。你跑的这带型有点奇怪，建议做个酶切看看。

sanna1

没切的质粒跑出来的电泳图不是一条带吗？为什么会有两条，三条的问题?
" V, q0 ?. j6 t) z# \: v能解释一下吗？

rexhz

做转染最好用试剂盒提，而且是去内毒素的那种。手提里面有很多RNA

86964109

回复 sanna1 的帖子0 m5 S% {8 q$ x* K& m) w

7 F6 ]/ P6 H5 V8 @" X) h3 G因为有超螺旋，线性、和缺刻3种质粒形式，他们的电泳速度不一样，线性跑得最慢好像，
( m8 {4 ]2 D  Z2 _- ?所以...  d  X1 a& Y* I, u* O! X) V' D! O

: k' X4 |/ Z9 v+ X& b% X1 w6 A5 q: Z补充内容 (2012-10-25 08:09):2 Y: i! Z$ \2 ^
如果是瞬转,建议环形质粒转染,因为环形质粒更容易进入细胞,这样可以提高转染后阳性率.7 y8 {: n2 c! b' \+ x$ O
有人说的：如果是挑稳转,建议线性化以后转,因为稳转不要求转染效率,线性化的质粒更容易整合到细胞的基因组中,这样可以提高克隆

zxcv12345

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7 M8 S! b- e, A; G
% n8 a3 ^7 T" K0 Q0 I转染纯度要求高，最好要用试剂盒提取质粒& _% N( }  o" P; A
提取后的最好为超螺旋，也就是一条带

yuhaoze

回复 86964109 的帖子  `8 D8 `3 g$ n9 D
* _+ W3 J  i' z) d3 `$ c
碱裂解法提不出线性的DNA