问个抽质粒的问题，Cartidge可以用布氏漏斗+滤纸代替吗？

mhqh

我用Qiagen的Mega方法抽质粒，就是一次能抽2.5mg的那种，加了P1，P2之后，有一步是过滤，把裂解的细菌啊蛋白啊什么的过滤掉。但是，Qiagen的那个叫Cartidge的一次性抽滤装置真心贵啊…… 我查了一下，可以用离心代替，但是离心好麻烦，因为溶液好多。 请问我可以用  布氏漏斗 + 滤纸 + 抽滤瓶  代替吗？  我感觉是可以的，但是没做过，抽质粒也没经验，请问有人做过吗？谢谢！

86964109

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. @3 Z9 v: i3 T5 E* S- i9 V. {3 ^0 v5 R9 _4 D5 ?. o, ?% j: ^
没这么做过，我们一般都是异丙醇沉离心的，也不算太麻烦，你可以先取一部分过滤下试试，检测下收率，看看质粒会不会吸附在滤纸上

mhqh

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9 m1 |' I% _1 T3 V6 h" k$ e
谢谢你的回复！！！. p8 q! n8 m  L$ _+ \2 N
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不过，你好像误解我的意思了。。。 异丙醇沉淀离心是最后几步吧？ 我的理解是这样的： 先裂解细菌，然后过滤，把裂解物啊残骸啊蛋白啊去掉（我问的是这一步）（据说这一步可以离心，渣滓就沉下去了，取上清液，但是好麻烦，因为加了P1，P2，P3之后，溶液至少150mL了），DNA在过滤下来的滤液里。然后用Qiagen-tip过柱子吸附DNA，最后才是异丙醇沉淀DNA离心得到DNA……+ [" E/ T2 W- O7 i  w
: D. H) V8 I5 ]. O  Q
其中，过滤那一步，Qiagen的那个叫Cartidge的装置真心贵啊…… 感觉原理上就和化学上最经常用的布氏漏斗抽滤装置一样，不知道能不能用布氏漏斗？谢谢你！

86964109

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* Y3 P8 K/ S* J$ j2 P  ~6 L  ?感觉应该是可以的，不过可能还是会有一部分核酸会吸附吧，先拿一部分试一试，

mhqh

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谢谢你！！～

weiyepan

回复 mhqh 的帖子* m; v% r5 |% Q2 |

4 b; |! I& a; i- a: P6 f离完心再过滤，效率会高很多。
: b0 z" i, E4 A9 q+ J  s另外，推荐一个牌子， MN的便宜又快速，在clontech有代理。

mhqh

回复 weiyepan 的帖子7 f/ y+ ~6 [# y0 d4 P

/ c5 B) l8 `2 U" S您好！谢谢！
1 S5 ?% ?. Q; B- u
/ Y0 o* j5 y7 i还有个问题，抽滤之后，有一步是，加 50mL buffer FWB2，我等到菌液都抽滤下去后，滤纸都被堵住了，再加FWB2就很难滤下去了，然后我就直接往底下的滤液里面加了... 这样操作会有问题吗？我不知道FWB2是干什么用的...

weiyepan

我好像没见过QIAGEN离子交换类型抽质粒的buffer里面有FWB2的啊？
* }# q0 K/ c/ M2 n你能把protocol贴上来？

weiyepan

回复 mhqh 的帖子" ?, T- {; F& k' m# f
" Z, l0 z5 C! G! L/ Q6 x7 L% f8 F# A
我好像没见过QIAGEN离子交换类型抽质粒的buffer里面有FWB2的啊？  c9 E/ S- f! h6 ?
你能把protocol贴上来？

rexhz

回复 weiyepan 的帖子! b5 h8 I( w/ S

/ k' _4 d# w% s9 L* k; ?NucleoBond® Xtra Maxi 是这个吗？