问个抽质粒的问题，Cartidge可以用布氏漏斗+滤纸代替吗？

mhqh

我用Qiagen的Mega方法抽质粒，就是一次能抽2.5mg的那种，加了P1，P2之后，有一步是过滤，把裂解的细菌啊蛋白啊什么的过滤掉。但是，Qiagen的那个叫Cartidge的一次性抽滤装置真心贵啊…… 我查了一下，可以用离心代替，但是离心好麻烦，因为溶液好多。 请问我可以用  布氏漏斗 + 滤纸 + 抽滤瓶  代替吗？  我感觉是可以的，但是没做过，抽质粒也没经验，请问有人做过吗？谢谢！

mhqh

回复 ouyi2738 的帖子% h* `7 c5 \% j5 {
! z9 P) h5 y+ t+ N' G8 b
谢谢！！

mhqh

回复 祁门红茶 的帖子3 F1 P. z% j% ^, e" `0 N/ z6 m, v

( @4 Z8 ~, n7 t4 s1 j额。。。 质粒在下面的滤液里好不好。。。 吸附了不就杯具了。。。

祁门红茶

* R( y& I3 C% \& l$ k" \* G) F( B& U! Q
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6 H- U. T% e! b" k& \/ T7 q
" Y) Z! @2 R( R' d, Q应该不可以，这个材料应该是带正电荷的，不是起到简单的过滤作用，是可以吸附质粒的。

ouyi2738

我们用的也是MN（macherey-nagel）的maxi，比qiagen的好用，不用抽滤，我在过滤纸前都简单离心一下，撇去上层的白色裂解物，滤的速度更快。

mhqh

回复 sunnh11 的帖子' @  r5 }' B( k/ b/ O4 ^2 f
( `) V, C) J& T
谢谢！ 4 m5 Y9 q' R$ ]! n' F
. D5 I8 e# o4 h( h* L  U: `
我有个问题，你是用抽滤还是常压过滤？就是我用布氏漏斗抽滤，就是底下用水泵抽，然后很快就漏下去，但是，抽了之后，蛋白质就把滤纸的孔堵住了，用那个FWB2的时候，就再也抽不下去了... 怎么办？

zhangtcm

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' \' J7 R6 p! v7 u* r! H% G2 [- t我那时候，大概是07年吧，用的是质粒抽提试剂盒，北京天为生物公司；其中一个是GFP的，转染P19细胞，还是可以的。1 O! P! o2 s( @! J4 O

2012-12-4 15:18 上传

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zhangtcm

回复 weiyepan 的帖子( Y! S# e# W) @: x3 _. H
* }! F$ T% k% U: B1 Q3 `
我那时候，大概是07年吧，用的是质粒抽提试剂盒，北京天为生物公司；其中一个是GFP的，转染P19细胞，还是可以的。
( o6 ~& Z& M' A9 @: y. k% l

2012-12-4 15:14 上传

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sunnh11

完全可以用漏斗和3M滤纸代替，以前没有Cartidge时，我们常常用过滤代替离心，没发现什么问题。

weiyepan

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" n) H' r6 I9 V9 I' q# m: T8 y5 g
3 E" \! T  Y, b: K( |6 }( `国产的大抽不是说原理上做得比国外差，现在抽质粒的方法都很成熟了。但是，国内的原料质量不稳定是肯定的，至于质控有没有做好，那是看一个个公司的良心了。3 o; z, z: ]! \
另外，QIAGEN和MN的大抽都有用的离子交换。现在离子交换方法的kit不多，成本高，国内销量不好所以没人做。国内用的都是硅羟基方法的，这种方法很难去除内毒素。至于说转染有没有问题，一个是看最终抽出来的浓度，另一个是看细胞好不好转。如果说都转的293T，那我看PEG沉淀也能做。