问个抽质粒的问题，Cartidge可以用布氏漏斗+滤纸代替吗？

mhqh

我用Qiagen的Mega方法抽质粒，就是一次能抽2.5mg的那种，加了P1，P2之后，有一步是过滤，把裂解的细菌啊蛋白啊什么的过滤掉。但是，Qiagen的那个叫Cartidge的一次性抽滤装置真心贵啊…… 我查了一下，可以用离心代替，但是离心好麻烦，因为溶液好多。 请问我可以用  布氏漏斗 + 滤纸 + 抽滤瓶  代替吗？  我感觉是可以的，但是没做过，抽质粒也没经验，请问有人做过吗？谢谢！

86964109

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# e  s" h3 [* V8 L没这么做过，我们一般都是异丙醇沉离心的，也不算太麻烦，你可以先取一部分过滤下试试，检测下收率，看看质粒会不会吸附在滤纸上

mhqh

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回复 86964109 的帖子' t; }/ S6 k# @( J
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谢谢你的回复！！！
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不过，你好像误解我的意思了。。。 异丙醇沉淀离心是最后几步吧？ 我的理解是这样的： 先裂解细菌，然后过滤，把裂解物啊残骸啊蛋白啊去掉（我问的是这一步）（据说这一步可以离心，渣滓就沉下去了，取上清液，但是好麻烦，因为加了P1，P2，P3之后，溶液至少150mL了），DNA在过滤下来的滤液里。然后用Qiagen-tip过柱子吸附DNA，最后才是异丙醇沉淀DNA离心得到DNA……
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2 k7 Z9 @: o/ \. @# ^; j9 |! f: i其中，过滤那一步，Qiagen的那个叫Cartidge的装置真心贵啊…… 感觉原理上就和化学上最经常用的布氏漏斗抽滤装置一样，不知道能不能用布氏漏斗？谢谢你！

86964109

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1 o& A. W2 k7 v0 A" R' D感觉应该是可以的，不过可能还是会有一部分核酸会吸附吧，先拿一部分试一试，

mhqh

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+ g: K2 e4 ~& }谢谢你！！～

weiyepan

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离完心再过滤，效率会高很多。
& S  A  e3 ]3 ?( {$ F另外，推荐一个牌子， MN的便宜又快速，在clontech有代理。

mhqh

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5 D: F2 p: ?- I0 ]3 C: w5 d您好！谢谢！- b& S  P5 N5 p6 X! G# N

$ F) M; C, n% o, I; a还有个问题，抽滤之后，有一步是，加 50mL buffer FWB2，我等到菌液都抽滤下去后，滤纸都被堵住了，再加FWB2就很难滤下去了，然后我就直接往底下的滤液里面加了... 这样操作会有问题吗？我不知道FWB2是干什么用的...

weiyepan

我好像没见过QIAGEN离子交换类型抽质粒的buffer里面有FWB2的啊？' U6 O8 ]2 U" D( t
你能把protocol贴上来？

weiyepan

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( H' I. }: _; ]% ~) r+ N7 Q我好像没见过QIAGEN离子交换类型抽质粒的buffer里面有FWB2的啊？$ f1 Z. p+ L# A$ u  [/ e
你能把protocol贴上来？

rexhz

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NucleoBond® Xtra Maxi 是这个吗？