问个抽质粒的问题，Cartidge可以用布氏漏斗+滤纸代替吗？

mhqh

我用Qiagen的Mega方法抽质粒，就是一次能抽2.5mg的那种，加了P1，P2之后，有一步是过滤，把裂解的细菌啊蛋白啊什么的过滤掉。但是，Qiagen的那个叫Cartidge的一次性抽滤装置真心贵啊…… 我查了一下，可以用离心代替，但是离心好麻烦，因为溶液好多。 请问我可以用  布氏漏斗 + 滤纸 + 抽滤瓶  代替吗？  我感觉是可以的，但是没做过，抽质粒也没经验，请问有人做过吗？谢谢！

86964109

回复 mhqh 的帖子! q1 o: W( K2 g; |: {9 M
4 z6 s9 s& P8 f, B' N" E, X
没这么做过，我们一般都是异丙醇沉离心的，也不算太麻烦，你可以先取一部分过滤下试试，检测下收率，看看质粒会不会吸附在滤纸上

mhqh

0 ?6 H, f6 W+ }# {9 w5 l3 F0 \; a; s! d& a
回复 86964109 的帖子
2 R1 G8 Z7 \3 F: ]$ n' o# x" z. L  O6 R; @* A
谢谢你的回复！！！
. O1 P% j' h" N6 W: H" F& Y" I/ n' m# N7 m( O0 e
不过，你好像误解我的意思了。。。 异丙醇沉淀离心是最后几步吧？ 我的理解是这样的： 先裂解细菌，然后过滤，把裂解物啊残骸啊蛋白啊去掉（我问的是这一步）（据说这一步可以离心，渣滓就沉下去了，取上清液，但是好麻烦，因为加了P1，P2，P3之后，溶液至少150mL了），DNA在过滤下来的滤液里。然后用Qiagen-tip过柱子吸附DNA，最后才是异丙醇沉淀DNA离心得到DNA……
, A" O$ V0 y5 l1 L  K" o6 a8 g- R, ]- z. u; Q+ f9 A
其中，过滤那一步，Qiagen的那个叫Cartidge的装置真心贵啊…… 感觉原理上就和化学上最经常用的布氏漏斗抽滤装置一样，不知道能不能用布氏漏斗？谢谢你！

86964109

回复 mhqh 的帖子
) h& {+ j4 L0 z2 i4 M
" j, v! }* J% m1 Q8 K! B感觉应该是可以的，不过可能还是会有一部分核酸会吸附吧，先拿一部分试一试，

mhqh

回复 86964109 的帖子* A% {5 x! k2 {6 o0 `6 e
; v- f5 c! {& x6 O2 h: }
谢谢你！！～

weiyepan

回复 mhqh 的帖子
  W, g- I! {6 O9 \$ i5 a% o6 P
6 b. ]. x4 L" }7 \8 D8 z6 ?离完心再过滤，效率会高很多。/ f  Z" ]- W( a
另外，推荐一个牌子， MN的便宜又快速，在clontech有代理。

mhqh

回复 weiyepan 的帖子
/ |0 r  R  p+ t4 k2 j5 |6 ?
( t) W$ v) _  `5 ~' Z9 \您好！谢谢！
. j  o9 r3 v8 M; k! f( C0 B+ @) b9 S. u0 W
还有个问题，抽滤之后，有一步是，加 50mL buffer FWB2，我等到菌液都抽滤下去后，滤纸都被堵住了，再加FWB2就很难滤下去了，然后我就直接往底下的滤液里面加了... 这样操作会有问题吗？我不知道FWB2是干什么用的...

weiyepan

我好像没见过QIAGEN离子交换类型抽质粒的buffer里面有FWB2的啊？& z4 h. z: A; U3 u
你能把protocol贴上来？

weiyepan

回复 mhqh 的帖子( Z. p9 j  m% _

! b4 c+ v/ w: t7 h' @4 c- ?1 H% Y  z我好像没见过QIAGEN离子交换类型抽质粒的buffer里面有FWB2的啊？6 w9 X- Y9 ?3 a1 E
你能把protocol贴上来？

rexhz

回复 weiyepan 的帖子; `6 Q# T6 H: H$ Y6 E) G
; I/ l  j) \( w/ ?/ u
NucleoBond® Xtra Maxi 是这个吗？