分离PBMC时的疑问？

gengtongyu521

分离PBMC时，有时会多吸取一些下方的分离液，以免细胞的浪费，这样，再离心时会不会不容易使单个核细胞离心下来，而悬浮在液体中呢？

Jonathan

不会。因为洗的时候用的是PBS，两个应该是可以互溶的。。
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HHvivian

如果有这种顾虑，PBS加多点。我也做过PBMC的分离，但未出现过单个核细胞离心不下来的情况。PBMC的分离还是比较容易的。

defu

操作基本过程如下：
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1、抗凝血约8ml，2h内收集，混匀充分；
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2、复温淋巴细胞分离液及1640；（室温自然复温2h或水浴锅中1-5min）
/ A! _0 l' K, \( Q- D& s" ^1 ?7 M+ M3 n0 f" u
3、2支15ml离心管中各加入4ml淋巴细胞分离液，离心2min离下管壁上液体；6 s0 p1 R. U2 f- x
  K1 w/ W5 ?5 V1 I
4、将8ml血吸至50ml离心管中，加入约8ml1640，混匀；
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5、使用BD产3ml一次性无菌塑料吸管，将混匀后的血慢慢加到淋巴细胞分离液上；, ?1 ?4 v, Q" X: M: }2 l
' W/ y4 T9 Z1 b( L5 t& K2 e8 C
6、1600rpm（440g/min），30min离心；
6 n, h( u( m) j
, k3 m% T: A+ g$ T: R3 J7、吸取上层血浆，用玻璃吸管吸取PBMC层至一新15ml离心管，加入1640至14ml，混匀；
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8、1300rpm（290g/min），10min离心；5 w# w5 s& \" c+ Z: H5 D, k- P
0 |5 f% P0 B3 n+ u
9、同样方法再次洗涤。
4 t& V/ W3 d4 n7 a  v. f
( d7 X; l: v5 n" g6 C5 I+ l0 [

pengxuleo

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+ g( Q0 K! D8 x, p. p4 s/ I# G
不会的，能不能离心下来要看缓存也的密度啊，你多加PBS洗，这样就稀释了分离液的密度，细胞就可以离心下来了

pengxuleo

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不会的，能不能离心下来要看缓存也的密度啊，你多加PBS洗，这样就稀释了分离液的密度，细胞就可以离心下来了

pengxuleo

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不会的，能不能离心下来要看缓存也的密度啊，你多加PBS洗，这样就稀释了分离液的密度，细胞就可以离心下来了

easternliu

上面的人吹牛，我之前有遇到，细胞都跑到分离液当中了，所以吸了很多分离液，当时头脑发热没混匀，所以离心出现你说的现象，细胞没下来。所以吸了分离液一定要混匀，尽量不要吸太多分离液，如果没办法太多了，可以适当增加离心转速。关键是要混匀。。。

sunny.yc

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% z) e+ e. ]. }多吸一些没关系，只要别吸太多淋巴细胞分离液当中的”杂质“和下面的其他细胞就行了，然后用DPBS或1640混匀一下细胞，完全没有问题，我一直都是这么做的

pengxuleo

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你说我吹牛也得好好看看内容啊，混不混匀是实验常识问题，没人会专门提出来