如何形成拟胚体EB

小ga

请教各位战友，hES和iPS如何形成拟胚体EB ?EB形成后，主要想往神经干方向分化，如果采用悬浮培养，EB培养液应该如何配制？看了好多文献，EB培养液也各有不同，不知如何选择，请各位赐教！灰常感谢！

wwy551

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版上之前已经有很多做EB分化的讨论，可以找来看看。一般就是用dispase消化，时间可以久一点，把克隆轻轻刮下来或者吹打下来，静置沉降后，吸去上清，加DF12重复一遍。用HESM重悬克隆接种到低贴附板上，第二天开始换分化培养液，换液前先吸去HESM，用配分化培养液的基础培养基洗一遍克隆，去除HESM里面带的细胞因子。
. a# n. y4 Y; B# ~至于做EB分化用的分化培养液，看你想向什么分化了。一般向外中内三个胚层分化都有比较常用的细胞因子，可以参考文献，看看大家比较通用的是什么。

小ga

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% Q  v% _* Z; k) {7 R谢谢！还有一个问题。形成EB后，是直接将EB接种到Matrigel包被的孔里，还是说需要胰酶将EB消化为单个细胞后接种？望指教

wwy551

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7 d% _: h5 z; C+ T( o/ K" \
消化成单细胞之后接种

小ga

回复 wwy551 的帖子% O- G6 a7 |8 l: q
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非常感谢

小ga

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1 A/ G) ~* l8 W; t$ H4 z# {$ ]% t3 |# r- N# r
是用0.05%的胰酶吗？可不可以用Accutase呢？

ligangtiancai

我们实验室是用IV型胶原酶将iPSC克隆消化下来后吹成小团块做EB的，效果不错

echoxy1020

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. C/ x- M% Y- a* W
0 k5 u% B; k* S  w. Q您好，弱弱地问一下HESM是什么？您是指悬浮的克隆碎片会自然生成EB吗？

wwy551

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3 q' n( a1 u( G3 _2 U. m
' j  M7 C; g5 d: B  ~human embryonic stem cell medium 人胚胎干细胞培养基

echoxy1020

回复 wwy551 的帖子8 \2 e' l* [# `" _% |7 O

: D3 z8 B5 j1 b, G1 O1 M8 A我最近在做用人ips细胞形成EB，方法是用EDTA消化掉滋养层细胞，然后收集ips细胞制成悬液，加到96孔板离心，原则上应该24小时后就可以形成EB了，但不知道为什么总是不成功，不知道您有无相关经验，请赐教，谢谢！
( @3 a- y2 c  t5 W! J% _% @& N0 W, x! k( r然后我查了下其他方法，悬滴法是否适合人ips细胞？如果可以，悬滴的培养液用什么？形成后悬浮培养用的培养液要更换吗？待到EB接种到matrigel后再换分化液？' k4 q" ?( t. z
悬浮法看起来好像更简单一些，而且也许因为没有成单细胞是不是成功率会更大一些？但是如何控制EB大小？我看你说第二天可以换分化液，那什么时候种EB呢？2 [: |7 m" W$ u3 q4 {6 S& W7 m! V
不好意思问题比较多，做了好久都不行，实在是焦灼😂😂😂