无血清培养肿瘤干细胞，细胞很容易aggregation，请问怎样处理

wy200616

我用无血清培养基，加生长因子培养肿瘤干细胞，corning公司的低吸附瓶，但是细胞容易aggregation，该怎样处理呢？谢谢了！

硕果累累_555

肿瘤干细胞就是悬浮培养的啊，通常都会聚团成长的。

qq348940434

是不是细胞因子浓度问题，我到现在都没把干细胞给养出来。
% L0 w4 G/ I( f6 I# j+ U4 u* O  还有就是 你那个corning公司的吸附板是用的那个3471的六孔板么？

570505

回复 wy200616 的帖子5 G. \# Y2 z, o! j9 `& i
9 |% C3 e$ j0 b& b7 R! W
aggregation是悬浮培养中经常遇到的问题。是肿瘤球培养的大忌。; |* R7 Z- m' h
下次你可以注意一下：一是细胞浓度不可过大，细胞过密容易聚集。
* N& c3 i) E$ r1 L# ?                    二是摇晃要适度，不可过于剧烈。1 @1 k& ?/ D  Z- D! _3 o
                    三是你可以试试先贴壁培养，然后再用干细胞培养液刺激成球，这是防止聚集的重要方法。
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解答完毕。

qq348940434

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" J7 W9 ~6 s( V$ B8 y( V! e你所说的先贴壁培养，再用干细胞培养基养，我上学期也有试过，但是不知道为啥，也没养出来，养了5天左右就看见一瓶子的膜一样的东西飘着。。。

570505

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那应该是细胞有污染了

mike19840320

是细胞密度太大的问题，可以在96孔板中，使没孔1个或2个细胞，这样就不会发生细胞聚集。

qq348940434

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没，这种绝对不是细胞污染的样子，应该是细胞浓度的问题，还有可能就是我生长因子的浓度高了，我是EGF和bFGF都是40ng/ml的浓度。

qq348940434

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请教个问题，为啥我按你所说的第三种方法 里面直接加入无血清培养基（生长因子），然后过了1天，现在看起来都是浑浊的。

xiaolong

悬浮生长，能看到聚团的，很正常，就像单个微生物培养后生成菌落一样一样的