无血清培养肿瘤干细胞，细胞很容易aggregation，请问怎样处理

wy200616

我用无血清培养基，加生长因子培养肿瘤干细胞，corning公司的低吸附瓶，但是细胞容易aggregation，该怎样处理呢？谢谢了！

硕果累累_555

肿瘤干细胞就是悬浮培养的啊，通常都会聚团成长的。

qq348940434

是不是细胞因子浓度问题，我到现在都没把干细胞给养出来。. v5 V% f( h4 i; X5 o6 H. M; Q
  还有就是 你那个corning公司的吸附板是用的那个3471的六孔板么？

570505

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7 D) G6 r$ x, M% I4 e) D5 ]: {
$ f* H) A* I4 L% e- L! x# x9 Baggregation是悬浮培养中经常遇到的问题。是肿瘤球培养的大忌。  X4 E' X3 h6 X/ w7 ^+ M4 X
下次你可以注意一下：一是细胞浓度不可过大，细胞过密容易聚集。
7 ]1 P  |3 ~  z& z4 v, M                    二是摇晃要适度，不可过于剧烈。
8 @  x, G1 H0 V! e# |% u- k                    三是你可以试试先贴壁培养，然后再用干细胞培养液刺激成球，这是防止聚集的重要方法。
" X# G% V6 e  T  ^: d# e( E& I: T7 U; |; f4 k7 S* S
解答完毕。

qq348940434

回复 570505 的帖子: h" r. N* o) b5 N2 v

: d6 ~% N: N3 p1 |- N1 L你所说的先贴壁培养，再用干细胞培养基养，我上学期也有试过，但是不知道为啥，也没养出来，养了5天左右就看见一瓶子的膜一样的东西飘着。。。

570505

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& W4 c3 z4 I+ v( }6 e/ R. Q$ j" l/ J; @8 y- s, \/ o
那应该是细胞有污染了

mike19840320

是细胞密度太大的问题，可以在96孔板中，使没孔1个或2个细胞，这样就不会发生细胞聚集。

qq348940434

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9 |( d4 d* ?/ x8 e2 L# j5 r1 w9 n4 f2 L
; T  A. i8 J2 B! R没，这种绝对不是细胞污染的样子，应该是细胞浓度的问题，还有可能就是我生长因子的浓度高了，我是EGF和bFGF都是40ng/ml的浓度。

qq348940434

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5 B* H2 Y. ^9 }6 d2 J' G
3 W/ \5 V8 x) z+ @请教个问题，为啥我按你所说的第三种方法 里面直接加入无血清培养基（生长因子），然后过了1天，现在看起来都是浑浊的。

xiaolong

悬浮生长，能看到聚团的，很正常，就像单个微生物培养后生成菌落一样一样的