无血清培养肿瘤干细胞，细胞很容易aggregation，请问怎样处理

wy200616

我用无血清培养基，加生长因子培养肿瘤干细胞，corning公司的低吸附瓶，但是细胞容易aggregation，该怎样处理呢？谢谢了！

硕果累累_555

肿瘤干细胞就是悬浮培养的啊，通常都会聚团成长的。

qq348940434

是不是细胞因子浓度问题，我到现在都没把干细胞给养出来。4 P5 l5 P& b7 ^; a0 ?' |
  还有就是 你那个corning公司的吸附板是用的那个3471的六孔板么？

570505

回复 wy200616 的帖子
- m( X8 V$ F0 e0 U
. ^9 M& }3 K# d- G9 \aggregation是悬浮培养中经常遇到的问题。是肿瘤球培养的大忌。
0 r" P- E; `$ [" e& m下次你可以注意一下：一是细胞浓度不可过大，细胞过密容易聚集。
0 b- E" C1 E5 F6 T                    二是摇晃要适度，不可过于剧烈。
/ k7 V: v' f/ g* J; J/ N                    三是你可以试试先贴壁培养，然后再用干细胞培养液刺激成球，这是防止聚集的重要方法。& K: {4 j- B3 z& Y" C( D5 R9 o& q' M

7 ~. ^$ `6 ?7 ?5 n解答完毕。

qq348940434

回复 570505 的帖子. M1 q6 b5 o3 ]1 j/ w& x6 V
( G0 v8 n3 S; A8 ~
你所说的先贴壁培养，再用干细胞培养基养，我上学期也有试过，但是不知道为啥，也没养出来，养了5天左右就看见一瓶子的膜一样的东西飘着。。。

570505

回复 qq348940434 的帖子& S! Q8 _8 G1 H% ~1 l+ b$ [. }% f
+ [0 J5 R5 Y: K( @1 w
那应该是细胞有污染了

mike19840320

是细胞密度太大的问题，可以在96孔板中，使没孔1个或2个细胞，这样就不会发生细胞聚集。

qq348940434

回复 570505 的帖子
  d( Z, l/ J9 R" C& e
/ t( i1 p0 W( X5 d2 C没，这种绝对不是细胞污染的样子，应该是细胞浓度的问题，还有可能就是我生长因子的浓度高了，我是EGF和bFGF都是40ng/ml的浓度。

qq348940434

回复 570505 的帖子
, ]' Y" l% a; [+ v6 J% G$ b& O$ v# P8 [' s
请教个问题，为啥我按你所说的第三种方法 里面直接加入无血清培养基（生长因子），然后过了1天，现在看起来都是浑浊的。

xiaolong

悬浮生长，能看到聚团的，很正常，就像单个微生物培养后生成菌落一样一样的