无血清培养肿瘤干细胞，细胞很容易aggregation，请问怎样处理

wy200616

我用无血清培养基，加生长因子培养肿瘤干细胞，corning公司的低吸附瓶，但是细胞容易aggregation，该怎样处理呢？谢谢了！

硕果累累_555

肿瘤干细胞就是悬浮培养的啊，通常都会聚团成长的。

qq348940434

是不是细胞因子浓度问题，我到现在都没把干细胞给养出来。
! h  a' f; \; `, ?; l& |7 D  还有就是 你那个corning公司的吸附板是用的那个3471的六孔板么？

570505

回复 wy200616 的帖子% x' j- V- K4 w( V

. \6 {# e$ F3 ?6 G+ h2 R5 naggregation是悬浮培养中经常遇到的问题。是肿瘤球培养的大忌。4 e& z. Y) z& ~6 m
下次你可以注意一下：一是细胞浓度不可过大，细胞过密容易聚集。' ?3 H1 v) z- R
                    二是摇晃要适度，不可过于剧烈。8 y7 U* M' b- y6 ?8 y; G8 X9 I
                    三是你可以试试先贴壁培养，然后再用干细胞培养液刺激成球，这是防止聚集的重要方法。
1 K: a1 l% y6 ~% f
- }1 ]- H7 S' w* }2 @7 ?解答完毕。

qq348940434

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! Z- o, o4 j1 T
: H# ^" n9 i. Z你所说的先贴壁培养，再用干细胞培养基养，我上学期也有试过，但是不知道为啥，也没养出来，养了5天左右就看见一瓶子的膜一样的东西飘着。。。

570505

回复 qq348940434 的帖子3 `) L/ Q, c2 B, @

& P; b* h, B' P那应该是细胞有污染了

mike19840320

是细胞密度太大的问题，可以在96孔板中，使没孔1个或2个细胞，这样就不会发生细胞聚集。

qq348940434

回复 570505 的帖子8 G7 i& n+ p, ~. f7 d" c- f

: c, o3 |# n& M% g% S; K: t没，这种绝对不是细胞污染的样子，应该是细胞浓度的问题，还有可能就是我生长因子的浓度高了，我是EGF和bFGF都是40ng/ml的浓度。

qq348940434

回复 570505 的帖子+ v; o! a" C# ^& E
- m$ @) P# v* c, r( `% j& N3 |7 L& ~9 @
请教个问题，为啥我按你所说的第三种方法 里面直接加入无血清培养基（生长因子），然后过了1天，现在看起来都是浑浊的。

xiaolong

悬浮生长，能看到聚团的，很正常，就像单个微生物培养后生成菌落一样一样的