关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

回复 liaoyanstudy 的帖子
1 U8 E8 e! y+ m: f7 D! Y1 D/ H
6 b% u* |" @: i0 I/ T你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？
: K$ P% b1 o; V+ t临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？
' }8 K! M3 @: ~培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？
- ^+ I0 {1 X* I$ C: M1 H5 X越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

回复 liaoyanstudy 的帖子
' |  d) @0 e2 o% ~/ X
4 @; h+ g1 A# E* X1、这张照片是培养几天的？
9 [* h* F# ^" [& i) s% S2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？7 k. D# M3 U5 I' A" N
3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？8 d  X' c3 B5 ]: z* p
4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）
% l, F6 m2 _0 Q/ X# A了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

回复 yinfuhua 的帖子
: V" V& B7 X& N; J% B, L
  M5 F: T% q5 o  ^3 e% a  R  @1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；* H+ s; V  ~! R6 B6 v; a# a
2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~
# d/ c, x, x- a' v! r& h& {3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清
# n7 \3 W8 ^2 s8 |6 E  l, b4：长满50ml培养瓶花了18天。; v/ ]( [0 [9 T& z! r* I
谢谢~

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子
$ j6 |* r+ U7 N: T" @) `* b+ P
1 f( S5 H, K6 M. ]/ }1 t/ {2 I1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；) @8 {" @( V8 [4 V
2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清
- x9 u7 Q2 s: k# R3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天6 y% Z+ j& m' e7 X, T' v+ y
4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子- `- _5 W* o, U/ M& v& Q
" l3 w7 H$ G8 j% _! i( X1 B# O4 I
谢谢~