关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

回复 liaoyanstudy 的帖子0 W7 V9 [! c4 Y# z

& o: \4 t9 h$ F% c9 E7 F你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？9 s/ M6 |6 q  e
临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？; n$ [# W0 [& M/ C5 j0 x
培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？
3 k9 P! x8 I$ Z越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

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0 f6 r" G) \/ S# c  w+ Z5 F5 ]7 O; E9 m+ f1 H" V. Z  l1 c
1、这张照片是培养几天的？
* b7 `( h1 x7 U2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？0 y2 }: |: |; `& ]/ A8 p
3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？
- i, m# o4 Q& ?7 X4 X/ w4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）
) g1 Q  m& }( {( n5 h了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

回复 yinfuhua 的帖子2 ^8 K1 M# i# n' U
* `5 X, M- L  |, D7 a  |
1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；, P' K9 L2 d  U" s6 Q
2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~* R# x9 z9 x# u& W0 |9 K
3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清4 ^6 |; D- A1 m- l# K; {+ h+ P* s
4：长满50ml培养瓶花了18天。
3 ~4 f( Z  @1 ]* |谢谢~

liaoyanstudy

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$ ~0 j2 J, n- ^- e+ ^. f2 A$ N" N1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；& t/ A  T  M6 d! t
2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清) \9 E8 z/ F0 F3 i( S
3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天* I- `% {. J- i$ g5 V$ P) G- X
4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子* t0 o7 P; i5 m: O, Z+ K
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谢谢~