关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

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2 g# ?! h; `8 L5 }( R
你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？
$ A$ e6 u  @! ]临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？
# Y- Q' o3 h1 b; R$ c6 X培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？+ g- j2 C' ?( j) T  ]$ T  u' H
越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

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1 i" |, t7 b: ^. l- J1 O0 ^9 t. A9 E2 ?# {, R1 u1 n0 _
1、这张照片是培养几天的？
4 S+ \7 |8 u8 f  S7 b6 c2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？
+ o4 K2 Y4 x* r  q# M/ }3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？4 l) Z/ _! u5 c% U/ ]4 ~
4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）
! j& p7 e* n' q2 j) R8 ?  G了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

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! y/ Y* B% ?& W! m" ~
. `) ]7 [, q; S# U+ M/ C1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；
) Y9 Z9 [4 `! k8 @- v- U: i2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~
3 g1 _! D" w1 u7 z3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清
6 m  P3 l* h2 ?( D; N4：长满50ml培养瓶花了18天。
% o# B6 {1 c- p5 U谢谢~

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子; z3 o% c# e% }" k- L. C. t
# j" }3 a* F1 n3 E' }! M/ G
1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；
$ V8 V) ]9 _7 p/ u- y2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清
  _% _7 v4 m0 z5 m5 d9 f3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天
) {6 M" [' N" u4 G4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

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" K# i* Z- u, U" [$ j5 A! C6 e; t
0 i4 \0 f! q* ?( I# Z  r谢谢~