CIK加液后产生絮状物，大家来分析一下原因！！！

lyj-0017

CIK细胞起始阶段生长良好，细胞集落较多，但是在加液之后，细胞集落变大，并且聚团较大且有部分集落贴壁，后续培养过程中便会发现培养袋中出现絮状物，以至于后续培养过程中一直存在絮状物，细胞也死亡较多，不知道大家有没有遇到过这种情况？是我加液的问题还是别的什么原因导致的呢？

jenvy121

你的液体是否为无血清培养体系？如加了血浆，血浆是否灭活？血浆里面未灭活的补体可能会对细胞的生产产生此类作用。3 A+ d: Z: ?1 D$ j  z* l
如是无血清培养体系，那么培养液使用前是否预热，会不会是低温产生的应激导致细胞出现此类状况。

三月桂花香

操作过程中是否被污染了？或者你的 培养基是否被污染，絮状物是不是真菌类污染可能性大》？

lyj-0017

回复 jenvy121 的帖子! _# @9 Q* [, H* q9 x2 O
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我们用的是无血清培养基，培养基在使用之前是放在室温下平衡，但是室内是开的空调，温度也就23度，我也怀疑是温度的问题。0 M% p* M1 L2 O7 ]. L& x  @# T' i/ e. ^6 U
至于你说的预热培养基，应该是放在37度孵箱中还是37度水浴中呢？我曾经把培养基放在37度孵箱中，但是拿出来之后发现培养基颜色太紫，应该就是培养基pH值偏碱了吧，这样也会对细胞生长不利吧？不知道你们是如何预热的呢？

流泪的鱼

先排除污染，如果倒置相差显微镜下观察团块是树枝状的，就是真菌污染。培养基是第二天变黄，非常黄就是细菌污染。也可以去培养液送到医院的检验科，做细菌培养和真菌培养。$ [! ~, D7 T8 B& m9 c  o! l/ E
如果不是污染，就是死细胞，死细胞会释放DNA，缠绕其他细胞，形成团块。那么，在判断细胞是如何死的。是不是操作不当？是不是换了新牌子培养基？是不是温度和CO2的问题？细节很多，你要一一排除。

lyj-0017

回复 三月桂花香 的帖子$ y5 U) s, `0 Q8 a1 d
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不像被污染的样子啊，等我上图

sunny.yc

回复 lyj-0017 的帖子
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一个解释是，细胞受细胞因子刺激过度，有些患者的细胞不太能耐受细胞因子刺激
* u& B: e& P0 l4 B& n! K还一个解释是，自体血浆没有灭活/ Y0 a; T+ a9 [: O- w: [$ f

4 n* I3 I; t* e8 C还有，培养基预热的话，可以扔培养箱也可以水浴，不过我不太建议用37℃，25℃就可以，我个人的经验是觉得37℃对培养基里的成分损失比较大
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以上都是个人意见，望有高手点评

lyj-0017

回复 流泪的鱼 的帖子; [' V! w4 O+ i7 N/ @5 `
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现在来看的话，可以排除污染，我还是能够分辨清楚是否发生污染的。+ J! u) t" Q. {! J$ P, p7 j& O
所以现在认为是细胞死亡，具体原因还需要进一步排查。培养基一直是没有改变，CO2和孵箱温度也不会有问题；至于别的不当操作嘛，我现在认为有两种可能，一个是培养基温度，一个是添加的细胞因子浓度，还有别的因素不？请帮忙提供参考一下，多谢啦~

lyj-0017

回复 sunny.yc 的帖子
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我现在也怀疑是细胞因子的问题，可能对于有的病人过高，因为前面的病人养得也还是不错的，你认为哪种因子的浓度过高会对细胞不利呢？IFN-r? OKT3?抑或是IL-2？
; l6 E7 d. e% ]$ c培养基预热这个问题，我赞同你的说法，但是，我发现，将培养基放在孵箱中预热，培养基颜色会变紫，这是否意味着培养基pH值偏碱了呢？这时，培养基温度倒是提高了，但是pH值也同样升高了，这对细胞也同样不利吧？, f# R2 x4 O6 a0 p( m6 A
用水浴是不是会更好一些呢？

lyj-0017

上两张图片，大家看看再分析一下