CIK加液后产生絮状物，大家来分析一下原因！！！

lyj-0017

CIK细胞起始阶段生长良好，细胞集落较多，但是在加液之后，细胞集落变大，并且聚团较大且有部分集落贴壁，后续培养过程中便会发现培养袋中出现絮状物，以至于后续培养过程中一直存在絮状物，细胞也死亡较多，不知道大家有没有遇到过这种情况？是我加液的问题还是别的什么原因导致的呢？

jenvy121

你的液体是否为无血清培养体系？如加了血浆，血浆是否灭活？血浆里面未灭活的补体可能会对细胞的生产产生此类作用。/ p' ~$ \% C& q: q# K/ n
如是无血清培养体系，那么培养液使用前是否预热，会不会是低温产生的应激导致细胞出现此类状况。

三月桂花香

操作过程中是否被污染了？或者你的 培养基是否被污染，絮状物是不是真菌类污染可能性大》？

lyj-0017

回复 jenvy121 的帖子8 P# i; m1 U' D% O8 p

& m& z. J+ }/ B! A我们用的是无血清培养基，培养基在使用之前是放在室温下平衡，但是室内是开的空调，温度也就23度，我也怀疑是温度的问题。6 M+ A4 d+ c. r  @/ h# c5 ]
至于你说的预热培养基，应该是放在37度孵箱中还是37度水浴中呢？我曾经把培养基放在37度孵箱中，但是拿出来之后发现培养基颜色太紫，应该就是培养基pH值偏碱了吧，这样也会对细胞生长不利吧？不知道你们是如何预热的呢？

流泪的鱼

先排除污染，如果倒置相差显微镜下观察团块是树枝状的，就是真菌污染。培养基是第二天变黄，非常黄就是细菌污染。也可以去培养液送到医院的检验科，做细菌培养和真菌培养。0 L2 X' `$ T) b! |/ N8 b
如果不是污染，就是死细胞，死细胞会释放DNA，缠绕其他细胞，形成团块。那么，在判断细胞是如何死的。是不是操作不当？是不是换了新牌子培养基？是不是温度和CO2的问题？细节很多，你要一一排除。

lyj-0017

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+ }/ x' U, L2 A
" l# \* B7 w, i不像被污染的样子啊，等我上图

sunny.yc

回复 lyj-0017 的帖子/ m. [0 M5 g; y. t. M% a: E

4 s" A( m; M( c8 f一个解释是，细胞受细胞因子刺激过度，有些患者的细胞不太能耐受细胞因子刺激8 p: S2 }9 _5 r* B  T6 U, X' f( m7 t
还一个解释是，自体血浆没有灭活2 J3 ^7 d; r% M% F$ b& g$ A

* ?8 N0 B/ z; O# M- V/ r还有，培养基预热的话，可以扔培养箱也可以水浴，不过我不太建议用37℃，25℃就可以，我个人的经验是觉得37℃对培养基里的成分损失比较大4 @1 |6 c) S! }4 @

: h/ i3 g9 r- c4 l以上都是个人意见，望有高手点评

lyj-0017

回复 流泪的鱼 的帖子' {- [7 F! S& C

+ \, q2 P. X$ B现在来看的话，可以排除污染，我还是能够分辨清楚是否发生污染的。! ?0 `( G* g  I) B) U
所以现在认为是细胞死亡，具体原因还需要进一步排查。培养基一直是没有改变，CO2和孵箱温度也不会有问题；至于别的不当操作嘛，我现在认为有两种可能，一个是培养基温度，一个是添加的细胞因子浓度，还有别的因素不？请帮忙提供参考一下，多谢啦~

lyj-0017

回复 sunny.yc 的帖子5 v1 K1 U7 t! [: P

2 U8 k7 s5 @: @( u- e* B' m我现在也怀疑是细胞因子的问题，可能对于有的病人过高，因为前面的病人养得也还是不错的，你认为哪种因子的浓度过高会对细胞不利呢？IFN-r? OKT3?抑或是IL-2？
8 w# S- _+ ]& V! _- g8 D. |培养基预热这个问题，我赞同你的说法，但是，我发现，将培养基放在孵箱中预热，培养基颜色会变紫，这是否意味着培养基pH值偏碱了呢？这时，培养基温度倒是提高了，但是pH值也同样升高了，这对细胞也同样不利吧？
5 }5 `( b1 y# C; F0 z' N! Z用水浴是不是会更好一些呢？

lyj-0017

上两张图片，大家看看再分析一下