CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

lyj-0017

我们培养的CIK细胞做流式细胞检测发现CD3CD56双阳性细胞比例非常低，还不到1%。3 u7 e. R- [  ]# Q2 Q! Q
第一，怀疑是购买的CD56荧光抗体不对，我买的是BD的鼠抗人CD56-PE抗体（克隆号B159）。不知道大家购买的CD56荧光抗体都是哪家的？以及买的是哪个克隆号的？
. Z2 C; d8 b. ?9 {3 D( c* ^+ b第二，怀疑是上机时圈门不对，不知道大家FSC/SSC跑出来的图是啥样的？以及圈哪部分细胞？附上我们跑出来的图供大家分析，图1是PBMC，图2是CIK，请大家给分析一下圈门对不对。
6 d2 J0 W' r; z! k3 f) [多谢拉！
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各输己键

CD3CD56双阳性细胞是什么细胞呢？你没有贴出那张1%的图来。
( Y8 ~2 u3 w% J) _) t$ W  T. f
" F; v  C9 j( {+ G3 c7 vCD3CD56双阳性细胞，应该算是NKT细胞，不是NK也不是T细胞。

rocfield

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% M& ?9 `/ Y3 ^8 R* @- H( h感觉下图设门不太好，圈上了部分细胞碎片，门再向右一点，可能会好一些，但是如果这样设门检测的双阳细胞不到1%的话，重新设门阳性率也好不到哪儿去。从这个图中看不出CD56抗体有没有问题。

shizaihappy

CIK测CD3CD56双阳率时圈的细胞应该是淋巴细胞，可以加个CD45，要是没有CD3，CD56也够用了

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子) F, L0 @6 j& F% H8 a

; {* ]! I5 I' Q- u4 P" r: ?5 d6 `) U现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子& [) z( b2 M- h9 L

! S" ^8 n' K, o再请看下面贴上来的双阳比例图。能否发一下你们做出来的图学习一下呢？

lyj-0017

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4 r$ K. e2 M  a- R) d  p1 l5 i5 H! K+ R
是啊，应该是圈淋巴细胞门。能否把你们做的流式图贴上来学习一下呢？

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-2 20:03
8 D3 m& b" E0 n7 N% v9 v6 W回复 各输己键 的帖子2 ]" T  G7 b0 g2 ^' ~

+ I! F: r8 l1 {) H* y# q现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

' L5 Y* E' n% _# Q3 W4 V" R
哈哈，我不做这个的。只是碰巧路过。
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你这个应该说圈门，分析还是做的挺好的，细胞培养前后，FSC和SSC是有变化的，因此出现这样的图也是可以理解的，如果担心可以加上活细胞染料；另外，你PE的电压是给低了些吗还是抗体加少了，怎么需要用到Biexponential方式呢？机器是Cantor？" Z: D- }% H9 ], K- W: s. u8 J1 j: M

: [0 a1 K# _8 D% U1 S1 A8 c& f

lyj-0017

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8 ?8 e8 T3 _. \' E6 M& s0 r; b) }3 g) H/ o+ O" T1 u0 O" a( q# s' h
1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。
1 I" T2 o$ W. D9 ^/ q7 h+ A/ u: G2、荧光抗体是买的BD的，说明书是按每1X10^6个细胞加入20ul荧光抗体。如果我是5X10^6个细胞也是加20ul抗体，对细胞染色有影响吗？% q- ]! Y/ [# J! d& ~
3、Biexponential是什么意思呢？这个也不懂3 g! C8 \6 K) V  Y7 U
4、流式细胞仪用的是BD FACSVerse TM

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-4 10:47
3 b8 d0 C3 U* U! B回复 各输己键 的帖子0 y) k) C6 x' ?  P" Q, x$ I

0 Q) ]' b3 J: R/ v* [3 I1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。

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对染色的影响不是太大，不过我们一般都会减半使用的，有的可能还要减得更多；Biexponential可以有助于显示细胞群的全貌。你这个图还是挺好的。