CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

lyj-0017

我们培养的CIK细胞做流式细胞检测发现CD3CD56双阳性细胞比例非常低，还不到1%。
. U9 U0 P6 U" g第一，怀疑是购买的CD56荧光抗体不对，我买的是BD的鼠抗人CD56-PE抗体（克隆号B159）。不知道大家购买的CD56荧光抗体都是哪家的？以及买的是哪个克隆号的？6 \  N$ v/ C, a) f! P. p+ C6 T
第二，怀疑是上机时圈门不对，不知道大家FSC/SSC跑出来的图是啥样的？以及圈哪部分细胞？附上我们跑出来的图供大家分析，图1是PBMC，图2是CIK，请大家给分析一下圈门对不对。
+ o$ O" A! e1 r( B$ Z多谢拉！
4 J8 G- @$ ^) v5 |0 v8 Y3 V

各输己键

CD3CD56双阳性细胞是什么细胞呢？你没有贴出那张1%的图来。) ^( y1 I% P) n5 s3 Q, ]7 {
0 t" Q6 h; g8 s! I
CD3CD56双阳性细胞，应该算是NKT细胞，不是NK也不是T细胞。

rocfield

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  Z% K' s; N2 J" R" g
0 [* r- B5 c9 L# Q. Z感觉下图设门不太好，圈上了部分细胞碎片，门再向右一点，可能会好一些，但是如果这样设门检测的双阳细胞不到1%的话，重新设门阳性率也好不到哪儿去。从这个图中看不出CD56抗体有没有问题。

shizaihappy

CIK测CD3CD56双阳率时圈的细胞应该是淋巴细胞，可以加个CD45，要是没有CD3，CD56也够用了

lyj-0017

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3 h! r& V8 Z: P/ z3 Q7 a
1 J9 f, z% |( r* ^4 W% E现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子
3 W" W# a; N9 U' t2 v3 E/ z  @" Y4 a4 p" U) g. l5 |/ e
再请看下面贴上来的双阳比例图。能否发一下你们做出来的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 shizaihappy 的帖子9 a* Y- `( I& g' c7 }$ ~7 r

$ N: A" u8 o8 w; T+ N) G* w0 G是啊，应该是圈淋巴细胞门。能否把你们做的流式图贴上来学习一下呢？

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-2 20:03
7 I$ {  V5 e) J& N  W# I7 g0 G回复 各输己键 的帖子
1 J! }2 {1 M: k) X8 y5 ^# ~' l
/ a6 V2 w! U) I+ @- {7 Y9 r2 i现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

! |! w! E2 k: L  o4 }& i哈哈，我不做这个的。只是碰巧路过。& j0 A, G4 f" _; y% S0 {

" A8 L' h% K2 J你这个应该说圈门，分析还是做的挺好的，细胞培养前后，FSC和SSC是有变化的，因此出现这样的图也是可以理解的，如果担心可以加上活细胞染料；另外，你PE的电压是给低了些吗还是抗体加少了，怎么需要用到Biexponential方式呢？机器是Cantor？& z* Z& I) z; U( b2 u5 Z
9 O# t" @. z1 Z! s! q& C

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子( h6 w1 b& |! x7 r+ i( k

4 t- ?1 X7 t1 a. j1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。
+ o: E3 |- G4 z5 `2、荧光抗体是买的BD的，说明书是按每1X10^6个细胞加入20ul荧光抗体。如果我是5X10^6个细胞也是加20ul抗体，对细胞染色有影响吗？8 I% v( N" p- V" Q+ Q3 Q6 k
3、Biexponential是什么意思呢？这个也不懂& g7 p1 n  }; r: B% H( ?
4、流式细胞仪用的是BD FACSVerse TM

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-4 10:47
5 x" i2 M# r, O; O" s回复 各输己键 的帖子
1 _) W8 P3 _; `; p' c) Q$ `; K7 Q, w- X( D
1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。

2 M$ S" h% [- W4 `2 F: B对染色的影响不是太大，不过我们一般都会减半使用的，有的可能还要减得更多；Biexponential可以有助于显示细胞群的全貌。你这个图还是挺好的。