CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

lyj-0017

我们培养的CIK细胞做流式细胞检测发现CD3CD56双阳性细胞比例非常低，还不到1%。
; o4 p5 C- x6 M, i& d0 q4 G第一，怀疑是购买的CD56荧光抗体不对，我买的是BD的鼠抗人CD56-PE抗体（克隆号B159）。不知道大家购买的CD56荧光抗体都是哪家的？以及买的是哪个克隆号的？
4 N2 Y# n. T, Y0 E第二，怀疑是上机时圈门不对，不知道大家FSC/SSC跑出来的图是啥样的？以及圈哪部分细胞？附上我们跑出来的图供大家分析，图1是PBMC，图2是CIK，请大家给分析一下圈门对不对。
  S' I. j: G, H# P+ k8 I多谢拉！
: f" S! [+ Y8 f5 L

各输己键

CD3CD56双阳性细胞是什么细胞呢？你没有贴出那张1%的图来。1 \  P' S9 v7 @# Y9 a* ?& v
2 A4 J- v, L' d$ v
CD3CD56双阳性细胞，应该算是NKT细胞，不是NK也不是T细胞。

rocfield

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2 K/ _- k1 j; l" E0 F) f' h( s3 A  Z9 g( I- J% v) Y! x* _
感觉下图设门不太好，圈上了部分细胞碎片，门再向右一点，可能会好一些，但是如果这样设门检测的双阳细胞不到1%的话，重新设门阳性率也好不到哪儿去。从这个图中看不出CD56抗体有没有问题。

shizaihappy

CIK测CD3CD56双阳率时圈的细胞应该是淋巴细胞，可以加个CD45，要是没有CD3，CD56也够用了

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子5 Y+ K  A. y$ n1 Y/ G; ^
; J/ @7 V% t9 h; s
现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子
0 Z. Y9 [, {5 K% a: _8 y  K8 s# a6 l- _) Z% t/ J- h& ?- Q$ o
再请看下面贴上来的双阳比例图。能否发一下你们做出来的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 shizaihappy 的帖子- \* A4 O% O1 [0 ]% j' ?

/ I7 y. R# c. E0 ^  Z是啊，应该是圈淋巴细胞门。能否把你们做的流式图贴上来学习一下呢？

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-2 20:03 & |8 h6 u8 T# ?5 Z
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2 K% \. E. R. [! y0 X( M$ Q/ {$ e: H& ^+ {% f
现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

, I' o* B" z" |( J* D5 j/ L
哈哈，我不做这个的。只是碰巧路过。; B) E7 {* T9 u! Z+ ~8 j( C- f

9 z# ]% h! ~" N' ]0 D你这个应该说圈门，分析还是做的挺好的，细胞培养前后，FSC和SSC是有变化的，因此出现这样的图也是可以理解的，如果担心可以加上活细胞染料；另外，你PE的电压是给低了些吗还是抗体加少了，怎么需要用到Biexponential方式呢？机器是Cantor？: j" c5 K" g; \! s

- K- R" o" ^( }! @  G

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子% z  h  g, f" `( n- y, o. E

8 w+ X/ K$ [- v/ O- t2 E1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。
( V+ F( D/ z! R( ]2、荧光抗体是买的BD的，说明书是按每1X10^6个细胞加入20ul荧光抗体。如果我是5X10^6个细胞也是加20ul抗体，对细胞染色有影响吗？
* b  O" W. [; ^/ w" K$ v; [0 e3、Biexponential是什么意思呢？这个也不懂/ \# e2 I* Z% i7 ^
4、流式细胞仪用的是BD FACSVerse TM

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-4 10:47
8 K7 F4 @& o. p2 P4 Q" ^回复 各输己键 的帖子' w! p, X- C7 \% v: ^8 m
, B" H/ g* n+ P4 p$ o: G6 S
1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。

" B, r2 `* ~/ U( H
对染色的影响不是太大，不过我们一般都会减半使用的，有的可能还要减得更多；Biexponential可以有助于显示细胞群的全貌。你这个图还是挺好的。