ips传代

穿裙子的猫

现在我正在进行IPS的第一代传代，用5ml枪头将克隆挑出，
7 u3 T' Z/ X; ?- R) a3 R( k9 A放入1.5ml的EP管内进行机械吹打，吹打2遍之后，肉眼仍
! |. p, X; J! s: G5 ]; b2 Z% ]可见未吹散的细胞团，这么大的克隆怎么能够吹打成小块呢？$ a8 b  O8 a0 [0 {; q
小块更容易贴附，是吧！
7 @- |* F8 x* P6 B% w:loveliness:各位高手们，你们怎么做的？

yuri.2004

你可以先用胰蛋白酶进行一下消化。这个过程要注意消化的温度和时间，注意在倒置显微镜下观察，消化适度后去除消化液，加点培养基，用枪轻轻吹开细胞。然后要经过离心去上清，再加培养基重悬后，分装培养就行了。。 最好有多孔板，方便操作和观察。

穿裙子的猫

回复 yuri.2004 的帖子0 ]2 z9 G* F# r6 G+ [& S

9 N! u, z" w3 O0 |' z5 b谢谢，第一代的话，我没有采用胰蛋白酶酶消化，- b5 D& v3 g* \
只是挑取，剩下的细胞团还可以继续生长。
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+ ^+ w5 u- j$ {0 S我观察了下，贴壁的细胞基本是贴在滋养层细胞上的，所以$ W" o( d4 @8 Y% X2 X3 y" j- f
想请问，消化的干细胞什么时候可以不用再铺被滋养层细胞呢？3 f& O1 k8 M( o! h* [4 }) a

yuri.2004

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3 W( l2 E  Y5 g; y6 Z
. V. ]# v8 c9 T0 d- g9 Q  {& n& |    按照你的意愿，你也可以把挑出来的细胞加到一个板里进行消化嘛~这样方便一点。
4 z, ]- m) ?/ m; u2 w; h8 e    滋养层细胞都不是必须的~有一种培养是无饲养层的，直接可以养IPS的~我们这边就是用无饲养层培养的。我看过资料，IPS和滋养细胞对酶的消化程度不同，应该是IPS先消化下来吧，你可以核对一下这个。只要把两种细胞分开了 ，直接用不加饲养层的方法，问题应该不大。不过细胞应该会有个适应过程。

穿裙子的猫

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传代后的细胞因为吹打太散了，现在是这样的，边界不清，平面生长，胞浆较大。跟你们的一样不？这像不像分化了的？

穿裙子的猫

孙帅帅

你是转染的肾小球表皮细胞吧，还是不要消化，那样细胞会很杂。以后传代用EDTA消化，不要用胰酶。

yuri.2004

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: l0 T% c8 z- M/ A7 o6 s$ p# v, B( G
你这个是正在诱导IPS吗？看着更像是诱导IPS过程中的图。还有部分饲养层细胞能看到。中间那些细胞团的确是IPS的样子，现在还看不出来是否有分化的。等细胞团足够大了，如果克隆团中间部分有颜色变深发黑，或者很明显的细胞形态变化之类的，那种是出现分化了呢。

yuhaoze

这些细胞不是iPS吧，不像

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+ g3 p5 c. k2 H! L9 X+ a! g. K8 p  i: L& ^$ r; a
把肾小球去掉就对了，是表皮里的黑素细胞，* C) E% n" T5 N* I
我现在用的胰酶都是**%胰酶/EDTA,用EDTA消化有什么不一样的吗？:D