关于CFU，成集落培养的问题

洛古16

请问，各位大神，
$ I$ `, q9 X- i3 a3 O/ t1、脐带间充质干细胞能进行甲基纤维素的成集落培养嘛？1 ?  z) r) B! O' P
2、成品的甲基纤维素培养基100ml，一般分装多少ml一管呀？

洛古16

回复 jjjddf 的帖子. J: f7 @, l9 L' v

5 g" A& t5 H) i; ^+ u

洛古16

回复 jjjddf 的帖子7 e8 i; o1 d! M
8 Z) w7 G! w' O, E0 z
吸量管会损失很多么？
. p' p3 \! i8 y# g" G对了，集落计数的时候，下面这种情况怎么按几个算呀？
3 s4 t1 I' w7 J

jjjddf

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/ b# G& J' ^" h8 ]5 j! O7 F7 G6 a, u3 Q1 w( c
我们用的是吸量管

洛古16

回复 jjjddf 的帖子, g* S: ^$ G6 p( {

0 Z# p0 N0 @7 `1 l15ml啊，那用什么分装呀，注射器还是吸量管啊

洛古16

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) I4 S) f( a: Z) n3 |5 e
) T0 M6 o8 {( d哈~~~非常感谢

子非鱼

我主要也是做的造血干细胞的集落。
5 Z# r! w% ~5 j9 v5 V. t% O( Q' J3 W我贴一下我在书上看到的集落重铺的内容，因为书上是讲自己配集落体系的情况，所以你斟酌着看吧。+ u# H* i, z; h2 g0 m0 O
集落重铺
( z# M3 Z) }, q# p: B4 @8 f3 `    注意：该技术只适用于使用甲基纤维素培养的原代细胞。琼脂培养基过于坚硬，极其难将其中的集落挑出进行二次铺板培养。若要将CFU-GM的原代集落进行二次铺板培养，只需将琼脂替换为甲基纤维素，并将2×McCoys替换为IMDM。
, z+ T, _! a3 I7 W材料/试剂
8 B6 D1 b7 p+ G4 k$ ]除非特别说明，所有材料均需灭菌( Q/ R' K- k1 \
(1)        带通风设备的超净台
& B3 G& c6 p/ [' B; p# F+ e  z(2)        倒置显微镜
2 D( J. e+ B# x6 Z, Q$ |0 w(3)        20ul微量移液器& _- X8 F* P2 s$ x2 b
(4)        含青霉素/链霉素的IMDM9 z: R' l, j0 X
(5)        12mm×75mm聚丙烯试管
' T. r8 B& O6 U6 F收集集落步骤0 C6 E: ^( O8 y- V, y) _% Q1 s
所有步骤均需无菌操作。8 s; [9 b$ o! _( l3 W; R
(1)        确定需要进行二次培养的集落数目。每个集落准备一只试管，加入100ul含有2%FBS的IMDM，拧紧盖子。' ^+ Q; T; r- Q6 }! m. A# A; n
(2)        将显微镜放置在有通风设备的超净台中。
9 t0 f1 x" ^2 I# H. K. [7 s% T; ^3 D0 s9 \(3)        将含有待收集集落的平板置于显微镜的载物台上，固定平皿并移去平皿盖。- ^% l' K  d7 A+ b1 E# d
(4)        如果显微镜没有配置平皿固定装置，可将胶带的黏面向外环成一个圆圈，将两个这样的圆圈粘在载物台上，将平皿置于其上，同样能达到固定的目的。& \  i+ V) k; H" e8 L1 z
(5)        找到目的集落后，用20ul移液器轻轻吸出集落。. c& ~! u0 d" E2 X
(6)        单独存在的集落最容易收集。
8 ?' N" y; b* b9 h(7)        将集落转移到（准备好的）含100ulIMDM培养基的试管中，吹吸数次以清洗吸头。
2 B+ C) Z. G( j(8)        集落收集完毕后，进行铺板操作。6 @6 c6 d/ o- E6 j8 v, i
集落收集后的铺板步骤7 a( b- `% c- K' E7 m& p
所有步骤均需无菌操作( V' [$ F  e( H* u
(1)        计算收集到的集落数，按每个集落1.1ml的量准备培养基混合液（包括甲基纤维素），静置使气泡溢出。
, O' i" e$ d7 q& m- \/ c2 j# A. k例如，如果你从含有IL-3、Epo和SCF等生长因子的平皿中收集了100个集落，那么就准备110ml培养液，所用生长因子与原始平皿中的相同，并在加入细胞之前加入甲基纤维素。/ n: d/ A- a: q8 ~* U+ y5 l: F
(2)        当培养液澄清后，用配用16口径（gauge）针头的3～10ml注射器，向每个已含有收集到的集落的试管中加入1ml，振荡混匀。' ]: D* x3 n  K5 a* s
(3)        静置。
/ b. X2 D0 r! d5 U(4)        将上述混合液倒入新的35mm平皿中，转动使液体覆盖平皿。
( K& [3 z! @. {甲基纤维素比较黏稠，总会有培养液残留在试管中，因此不能100%重铺所有集落中的细胞。如果你的实验需要定量计算最后的结果，可以加入一定比例的培养基混合液，通过矫正计算进行统计。例如，加入1.1ml（1ml培养基+0.1ml收集的集落）培养基混合液中的0.9ml，所得的二代集落数则大致代表了全部集落中82%的集落生成细胞。
, K) y4 \4 W# Y) O. \. {6 \(5)将平皿放在37℃、5%CO2/O2的湿润环境中培养14d.6 a2 t( K$ K; b. n, m+ T) A9 D

洛古16

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+ s9 H& q7 G8 ]) d7 D! P有，STEMCELL的含有因子，木有EPO的培养基。
, h7 y7 s( W: N; F3 t' U那，原代集落的二次铺板是怎么操作法呀？
+ f7 d7 X1 N7 U; J" E* k刚涉及成集落培养，看那个说明书好多都不认识。

jjjddf

我们分装一般是十五毫升，但是要看你的使用量来算

子非鱼

你现在是不是有一瓶甲基纤维素的培养基的体系啊？B cell的集落培养体系好像也是甲基纤维素的培养基，但是当时因为一些原因，我没有认真看产品的资料，所以也不确定。但是我们用的甲基纤维素的培养体系中有长出过间充质干细胞，但是不是聚集状的，所以间充质干细胞的集落应该是不行的。% [& A+ d) C2 a( M4 w- G
你说的二倍培养，三倍培养是集落培养中的吗？我没有听过，只知道原代集落的二次铺板。
. F& a8 W+ J8 G5 T% y& o2 f我是个渣渣，所以很多了解的都不全面。