BMSC腺病毒感染

liukuantj

各位前辈，我目前正在做GFP腺病毒转染兔的骨髓间充质肝细胞，有几个问题想请教下各位前辈。
1 `: r# N. W0 N* ]1，我查了文献，大概腺病毒转染Rabbit的MOI大概在200左右，那呢也就是说，我转染一个T25培养瓶（细胞量约为50万个细胞）的话，需要的病毒颗粒是一亿个病毒活性颗粒，我的GFP腺病毒浓度是1*10e11/ml,那么也就是只需要1ul就够了。我想问下，这1ul的病毒液该如何加入到培养基中，是直接加进去，还是先跟培养基预混后再加入。
  j# ~( M7 p( [! s1 d/ @2，一般转染的时间要多久？我上次大概转了24h，可是3天后，荧光依然是很弱。4 x. f3 f9 J( \8 ?
3，是否需要添加prolygrene?怎么加？; a, @' O2 @! K% Z! A, v$ J
4，病毒如何分装比较好，是直接分转成小包装，还是预混培养基后再分装？  H) f/ D: r2 h/ E+ }. d* q
谢谢！

luyue6453

回复 liukuantj 的帖子, r9 ]' w, |$ a

& }- }8 a% R; g9 v$ z( Q( n你如果怕1ul不好加，可以把病毒用培养液稀释10倍然后加10ul这样啊，这有什么好纠结的，再一个，不同细胞病毒感染能力都不同，你需要做预实验的，分别几个浓度，几个转让时间测一下，然后才能确定你的最佳操作。

liukuantj

liukuantj 发表于 2014-10-30 20:43 2 \8 s/ A9 ~; B
各位前辈，我目前正在做GFP腺病毒转染兔的骨髓间充质肝细胞，有几个问题想请教下各位前辈。
% h, }; Y, Y) W: x1 S7 @, r, J7 V1，我查了文献 ...

, U) o3 j0 {5 P& @4 T2 Q; D7 e# g! S/ ]
谢谢前辈，不知病毒液该如何分装，单独分装，还是跟培养基预混后再分装？我可以吧polybrene一块先和病毒液，以及培养基一块混合后，在分装-80保存？谢谢！

三木一叶

回复 liukuantj 的帖子; R! G0 D, _* @% Y4 |
( @4 f$ \' L: `8 e) Y. s
直接分装就可以了啊，不推荐加其他东西预混后分装，因为万一你还要用这个病毒做其他类型的细胞转染呢？
4 a3 E6 j. L& X' i4 _# S
  K* n) O& j2 G6 X我最近在做干细胞的转染，好难转啊