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[请教] 求助,原代分离羊膜上皮细胞不贴壁   [复制链接]

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楼主
发表于 2014-12-2 20:20 |只看该作者 |正序浏览 |打印
求助!!!我原代分离的羊膜上皮细胞,镜下能看到很多细胞,可是!!!他死活不贴壁!!!过了3天了还不贴!!愁死了,我分离了好几次了,细胞现在能消化下很多,但是就是不贴壁,我培养液是加了10%血清的,求做过的前辈帮分析下原因。9 N7 g- Y) y6 @) N
我的protocol是:洗净羊膜后,于0.05%胰酶37度水浴消化10min后弃消化液,再用0.25%的胰酶37度水浴消化20min后,离心收集,过滤。重复消化3次后种瓶培养。也试了用0.05%的胰酶37度水浴消化20min后,离心收集,过滤。重复消化3次后种瓶培养。都能得到很多细胞,但是也都不贴壁...求助!!!( p8 Y9 E: {2 }$ `. e! K
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发表于 2017-12-18 11:10 |只看该作者
回复 听不到 的帖子
  y" g2 |9 ~0 Q, L" [
: v% h0 Z  f3 O7 N& @/ F; S求培养体系,最好能附上参考文献,一起讨论,谢谢!6 ?3 ?& M5 \6 i: \% ]. A" ]

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发表于 2017-9-14 11:35 |只看该作者
回复 听不到 的帖子6 k1 |; `$ k* ^

0 V. ]7 E$ R* R, c请问你最后是怎么处理的,我也是这种情况。刚消化下来的有很多细胞,但就是不贴壁?

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发表于 2014-12-10 09:59 |只看该作者
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回复 coffee.cat105 的帖子' ~* U. R* W+ r$ m" v! r
( i; f% s+ P7 r5 g4 ^% o8 t
要用胶原铺板吗?...我是直接种的,但是不贴壁...
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发表于 2014-12-10 09:57 |只看该作者
回复 qiaozhong.9876 的帖子% \* j5 z, s/ O* _( L" Z" ?' ]: U
0 ?+ o6 @9 w# `3 B
我想问问你,你取得的羊膜是一层特别透明的吗?我最后取的是一层很透明的,特别薄的膜,我选了那个进行消化,贴壁了倒是,但是明显不是细胞,不知道是什么,碎碎的,我就怀疑我取得这层是不是不对。我是用载玻片把带血的一面完全给刮掉了,然后剩下一层极薄的近乎透明的膜,特别容易破
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发表于 2014-12-9 16:30 |只看该作者
回复 qiaozhong.9876 的帖子
' k5 r( d% ^) S; G4 J5 h- t% J- Y7 k& [5 h
都是这样的情况啊,是不是细胞不对,您做这个要用胶原铺板不呢?我会先用没有铺的板把间充质先贴掉,在把上清转种到胶原铺的板里,这样做对不对呢?
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发表于 2014-12-9 16:27 |只看该作者
回复 qiaozhong.9876 的帖子; [# x5 ^, v3 Y3 c- @2 W5 ?

  i( q. W, e! r胎儿面是指胎盘拿到以后脐带的那个面的第一层吗?我消化过那一层很薄,上面很多东西,轻轻一消化就会掉下来,但是没有细胞贴壁,是我没消化对吗?0 N1 @2 u; s: ?
我都要消化到靠近绒毛的地方才能有细胞,这一层就紧贴着绒毛,又怕细胞种类不对,特别是它还不能传代。
6 N, P  {7 r3 K' j- k- C你们一般是消化的胎盘上的羊膜还是胎盘周围的羊膜也可以啊?
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发表于 2014-12-8 21:54 |只看该作者
回复 coffee.cat105 的帖子
0 a" h/ T6 H  e' ]& x3 c* m. W5 |  H$ p9 j% F4 ~" o
我是新手,没有权限加你好友

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发表于 2014-12-8 21:51 |只看该作者
回复 coffee.cat105 的帖子
( S( S4 d% g' X* \. R% N
/ I/ T* K1 y& X  }7 U" `4 f. g我选取的是胎盘的胎儿面侧的那层薄羊膜进行消化的,那层细胞我们称之为胎盘亚全能干细胞,不知和你的是不是同一种细胞?我不知道你的那层羊膜状态怎么样,状态好的羊膜可以消化下好多细胞,有时候能达到10的9次方,这主要取决于羊膜的质量,这是我个人的经验,有的羊膜胶质比较多不好处理,还有就是要新鲜的羊膜,不要运输时间太长。关于你细胞传代不长,我觉得原代长的好的,传代也应该没问题,不知道你这种情况只出现一次,还是都是这种情况,如果都是这种情况那就麻烦了。
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发表于 2014-12-8 12:42 |只看该作者
回复 qiaozhong.9876 的帖子2 e8 ^0 }. l- q1 \# ~3 o
# B- |$ S0 D4 R/ G
请问能不能描述一下您消化的是哪个部分的细胞,我揭了胎儿面那一侧的薄薄的很有韧性的部分消化,从来没有消化下任何一个细胞下来,间充质都没有,一直要消化到靠近绒毛的地方才能有细胞,可是消化下来的还是羊膜上皮吗?, ]( L- _' L$ V
还有我的细胞原代长的很好,很快,可是一传代就停止生长,是为什么啊?; D9 x0 k( d- V
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