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[请教] 求助,原代分离羊膜上皮细胞不贴壁   [复制链接]

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楼主
发表于 2014-12-2 20:20 |只看该作者 |正序浏览 |打印
求助!!!我原代分离的羊膜上皮细胞,镜下能看到很多细胞,可是!!!他死活不贴壁!!!过了3天了还不贴!!愁死了,我分离了好几次了,细胞现在能消化下很多,但是就是不贴壁,我培养液是加了10%血清的,求做过的前辈帮分析下原因。
& @+ s4 |0 h; e" I, {: b# B( |我的protocol是:洗净羊膜后,于0.05%胰酶37度水浴消化10min后弃消化液,再用0.25%的胰酶37度水浴消化20min后,离心收集,过滤。重复消化3次后种瓶培养。也试了用0.05%的胰酶37度水浴消化20min后,离心收集,过滤。重复消化3次后种瓶培养。都能得到很多细胞,但是也都不贴壁...求助!!!. E& U$ r1 S, j4 }$ H0 S
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发表于 2017-12-18 11:10 |只看该作者
回复 听不到 的帖子
# D7 q- d- E& [
1 [+ }& I- }# r8 k1 d1 b求培养体系,最好能附上参考文献,一起讨论,谢谢!+ Q% f8 L  P& P3 h

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发表于 2017-9-14 11:35 |只看该作者
回复 听不到 的帖子, w% A2 P1 [0 r: u& W4 Q1 J
( ^( F: `: Z; y. I9 v1 ?
请问你最后是怎么处理的,我也是这种情况。刚消化下来的有很多细胞,但就是不贴壁?

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发表于 2014-12-10 09:59 |只看该作者
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回复 coffee.cat105 的帖子  D& J- a5 U- U2 E% Z3 j

& h, }, k, `. l, u( `, ]) d要用胶原铺板吗?...我是直接种的,但是不贴壁...
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发表于 2014-12-10 09:57 |只看该作者
回复 qiaozhong.9876 的帖子3 \: Q! {0 {, B0 A( V

* u3 E  r4 ]4 M我想问问你,你取得的羊膜是一层特别透明的吗?我最后取的是一层很透明的,特别薄的膜,我选了那个进行消化,贴壁了倒是,但是明显不是细胞,不知道是什么,碎碎的,我就怀疑我取得这层是不是不对。我是用载玻片把带血的一面完全给刮掉了,然后剩下一层极薄的近乎透明的膜,特别容易破
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发表于 2014-12-9 16:30 |只看该作者
回复 qiaozhong.9876 的帖子: n! d$ i/ Z4 I+ U2 P( u
9 Q8 r* O& L1 x' @4 }
都是这样的情况啊,是不是细胞不对,您做这个要用胶原铺板不呢?我会先用没有铺的板把间充质先贴掉,在把上清转种到胶原铺的板里,这样做对不对呢?
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发表于 2014-12-9 16:27 |只看该作者
回复 qiaozhong.9876 的帖子
& ?/ M, K% T7 b% a
# R" P; l$ V3 I! _+ O8 C  h胎儿面是指胎盘拿到以后脐带的那个面的第一层吗?我消化过那一层很薄,上面很多东西,轻轻一消化就会掉下来,但是没有细胞贴壁,是我没消化对吗?+ s( Z! P, a9 R- ?* `
我都要消化到靠近绒毛的地方才能有细胞,这一层就紧贴着绒毛,又怕细胞种类不对,特别是它还不能传代。
) U$ J' L" H/ E* O2 E+ v& y你们一般是消化的胎盘上的羊膜还是胎盘周围的羊膜也可以啊?
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发表于 2014-12-8 21:54 |只看该作者
回复 coffee.cat105 的帖子$ _3 g" S  ^" Q
  `; W" k" P: X. X& }) _
我是新手,没有权限加你好友

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发表于 2014-12-8 21:51 |只看该作者
回复 coffee.cat105 的帖子/ q, U6 o- H9 z

& U  x' B4 H# Z我选取的是胎盘的胎儿面侧的那层薄羊膜进行消化的,那层细胞我们称之为胎盘亚全能干细胞,不知和你的是不是同一种细胞?我不知道你的那层羊膜状态怎么样,状态好的羊膜可以消化下好多细胞,有时候能达到10的9次方,这主要取决于羊膜的质量,这是我个人的经验,有的羊膜胶质比较多不好处理,还有就是要新鲜的羊膜,不要运输时间太长。关于你细胞传代不长,我觉得原代长的好的,传代也应该没问题,不知道你这种情况只出现一次,还是都是这种情况,如果都是这种情况那就麻烦了。
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发表于 2014-12-8 12:42 |只看该作者
回复 qiaozhong.9876 的帖子
, P# ~$ r% `5 Q4 B
( T+ B% j) ?* ~5 t% X- c请问能不能描述一下您消化的是哪个部分的细胞,我揭了胎儿面那一侧的薄薄的很有韧性的部分消化,从来没有消化下任何一个细胞下来,间充质都没有,一直要消化到靠近绒毛的地方才能有细胞,可是消化下来的还是羊膜上皮吗?
5 D" v' v! p3 f$ a还有我的细胞原代长的很好,很快,可是一传代就停止生长,是为什么啊?/ a- X8 I- X) S7 F
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