手采集外周血培养CIK疑问！！！

lyj-0017

想咨询关于手采外周血培养CIK细胞的几个问题：; e+ n3 d3 a$ w/ Q. C
1、采集的外周血是先离心富集血细胞，再用生理盐水稀释后加入淋巴细胞分离液进行分离，还是先把外周血进行稀释再加入淋巴细胞分离液进行分离？这两种方式哪种方式更好一些？
  v# `! z3 g: G5 I2、如果采用经典的培养方式，D0 加IFN-r，D1加anti-CD3和IL-2，D0时往培养瓶中加入PBMC后必须经过2小时或者过夜贴壁，然后把悬浮细胞吸出来之后再加anti-CD3和IL-2吗？6 `: j' A. z5 B
3、如果贴壁后剩下的细胞用来诱导DC，第7天进行DC与CIK混合培养的话，是将所有的DC全部与CIK进行混合培养，还是将DC按一定的比例与CIK进行混合？$ d( z6 ~" @  P1 Y
2 ~. c* o' [& c) [5 R; V
请大家不吝赐教，谢谢哈~

nkcell

这需要看用的是什么牌子的淋巴分离液，还有离心力的大小，前面的方法时间长，对细胞有损伤，后面的对分离液和转数有要求

nkcell

2.是正确的2 w3 b2 x( d+ A1 I, I

nkcell

3.是按比例混合的

lyj-0017

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6 E; R6 m1 X1 f1 u* E
2 i6 h! s3 b  a' R7 F请问按照什么比例混合比较合适？

a276038921

个人感觉 先分离富集血细胞比较好 收集细胞量比第二种多

lyj-0017

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$ w& L. t( D. B8 t, Y4 s  F6 |* P- F) S8 Z
恩，感谢，其余两个问题呢？

levell

1、 先离心，分离出自体血清用于之后的细胞培养，然后血细胞至少1:1加入PBS（生理盐水中细胞状态并不好）稀释，再用淋巴细胞分离液分离单核细胞。$ C. W7 T7 M' J4 m4 v8 L# a
2、2小时贴壁移出悬浮细胞培养，因子添加就按你说的5 f: I/ `! U" C* E
3、将DC按一定的比例与CIK进行混合，一般1:10吧

a276038921

同意楼上的说法

a276038921

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6 j8 s) X& I) l3 E
: ~$ h4 e$ E# w) F. e但是DC和CIK混合的时候我是 全部混合在一起培养 这样比较省事个人感觉 主要还是要看你要干什么用了
* N4 q" B* K" Y4 G4 I